求救:翻译一篇生物学论文

RNA聚合酶四指示

沉默的内源性的DNA

我们先前发现的一种拟南芥sde4

突变说，展出的部分失去一个transgenesilencing

通路是否则依赖

对RNA依赖的RNA聚合酶六日

（ rdr6 ） （ 1 ） 。该sde4突变体植株还

有缺陷的小分子干扰RNA （小分子干扰核糖核酸）

生产和甲基正弦retroelement

atsn1 （ 2 ）在通路其后

相关rdr2 ， Dicer的样三日

（ dcl3 ） ，以及其他内源性的siRNA （ 3 ） 。它

很可能，这沉默通路相关

以RNA干涉（ RNAi技术）介导heterochromatinization

在schizosaccharomyces

pombe这也是依赖于小分子干扰核糖核酸， Dicer的，

andanrdr （ 4 ） 。所以，要调查

机制的两个转基因与retroelement

沉默，我们查处的分子

身份的sde4轨迹。我们这里所叙述

如何sde4编码最大亚基一

编码RNA聚合酶是有别于

真核细胞的RNA聚合酶的一，二和三

（其亚基在拟南芥中被指定

由前缀nrpa ， nrpb ，或nrpc ，分别） 。

在符合公约

命名的RNA聚合酶的，我们从今以后参考

这种酶作为RNA聚合酶四（油料

四）和世界上最大的亚基编码sde4

作为nrpd1a 。先前所描述的sde4

突变是现在指定nrpd1a - 1 。

1sainsbury实验室，约翰建设起中心，诺里奇

nr4 7uh ，英国。 2university东英格兰，诺里奇

nr4 7tj ，英国。

*向谁函授应予以处理。

电子邮箱： david.baulcombe @是Sainsbury - laboratory.ac.uk

屏幕上有缺陷的突变体，在跨

基因沉默用一种拟南芥线

（ gxa ） ，其中绿色荧光蛋白

（ GFP ）的转基因（图s1a ，指定G ）的

鸦雀无声，由马铃薯X病毒（ pvx ） -绿色荧光蛋白

转基因（图s1a ，指定一） （ 1 ） 。不像

rdr6突变体，其中完全失去绿色荧光蛋白

沉默在gxa背景下， nrpd1a - 1

展示了一幅延迟性发作的沉默中

生长点的植物（图1A和图。

s1f ） （ 1 ） 。在年轻的植物，叶片初期

涌现出绿色荧光蛋白的荧光，而且，在一个星期内，

沉默出现在局部地区，然后

散布在整个叶片。这种迟发性

表型的坚持，直到开花的时候

年轻的花序均GFP的荧光。

该模式的转基因mRNA和

小分子干扰核糖核酸积累相应的

数额GFP的荧光。因此，北

分析野生型和nrpd1a - 1鲜花

表明，增加积累的GFP

mRNA的表达（ 4.5倍）和pvx -绿色荧光蛋白基因的RNA

nrpd1a - 1对应到六倍减少

21日至24日-核苷酸（ NT ）的绿色荧光蛋白的siRNA （图

1B ）条相对野生型。在完全沉默

玫瑰花叶，那里nrpd1a介导的损失

沉默是不太明显高于

花卉，绿色荧光蛋白基因和siRNA金额

媲美。

RNA介导的DNA甲基化（ rddm ）

是与沉默的植物，并

可能导的一个小分子干扰核糖核酸引导效应

复杂的。一致rddm在绿色荧光蛋白

轨迹gxa植物，绿色荧光蛋白基因的DNA甲基化是

迷失在鲜花的rdr6和sgs3突变体沿

23 。长pfeifhofer等人，威廉斯年限。地中海。 197 ， 1525 （ 2003 ） 。

24 。汤匙egawa等人，电流。生物学。 13 ， 1252 （ 2003 ） 。

25 。支持由美国国家卫生署（ r37 - ai33443 ） 。我们想

谢谢j. pober ，每小时十孙，和D罗斯坦为

认真研读了这份手稿和第十林（大学

水牛） ，为分享card11缺陷

Jurkat细胞。分子相互作用数据已

存放在生物分子相互作用网络

数据库与加入代码209039到209044 。

支持在线材料

www.sciencemag.org/cgi/content/full/308/5718/114/

无线TTL闪光灯

材料与方法

无花果。中一至中三

2004年11月4日接受， 2005年1月14日

10.1126/science.1107107

与绿色荧光蛋白的siRNA （ 1 ） （图1 C ） 。在nrpd1a - 1

花卉，如绿色荧光蛋白的siRNA都减少，但

不缺席，我们只发现有轻微变化

该模式GFP的DNA甲基化（图1 C ）

这反差更明显的损失

atsn1 DNA甲基化nrpd1a - 1植物

（ 2 ， 5 ） 。因此， nrpd1a通路，是不是

唯一来源合适的siRNA为rddm 。

当初nrpd1a - 1 ，在相当大的重排

1号染色体扰乱

at1g63020 （图中一，二至七） ，然后用

其他nrpd1a等位基因与互补

同一个nrpd1a转，以确认

这种基因编码的nrpd1a 。序列

nrpd1a不结盟与拟南芥nrpd1a

同源（编码at2g40030 ）和两个

编码蛋白质的水稻植物特有

分支为最大亚基的RNA

聚合酶（图2A及fig.s2 ， A至C ） 。

一致nrpd1a作为世界上最大的

亚基一multisubunit油料四，食米

和拟南芥基因组编码两个

蛋白质可以成为第二大

亚基（ at3g18090和at3g23780 ） （ 6 ）

（图2B和图s2d ） 。测试沉默

的作用，这些基因拟南芥nrpd2

亚基，我们转化野生型gxa

植物倒置重复序列（ IR ）的构造说

将目标对准了RNAi以nrpd1a ，疑似

nrpd2基因，或阿丹（作为对照组） （图三，

A和B ） 。转化与红外

针对nrpd1a与疑似

nrpd2基因，但并不反对阿丹（图三， c

及d ） ，呈现延迟性发作的沉默

这样的nrpd1a - 1 。虽然两者nrpd2

基因将被灭活，由红外兴建

（图s3b ） ，两条路线的证据表明，

积极nrpd2轨迹，而不是at3g23780

比at3g18090 。第一，基因特异性扭转

转录聚合酶链反应（ RT - PCR ）

分析结果表明，大部分的nrpd2

誊来自at3g23780 （图s3e ）

及第二，在一个插入突变体at3g23780

（ nrpd2a - 1 ，图s3f ） ，但不at3g18090

（ nrpd2b - 1 ，图s3f ）消除了内源

小分子干扰核糖核酸（图3A ）在。

nrpd1a和nrpd2有顺序的异同

他们nrpa ， nrpb ， nrpc

同系物，在地区相应的功能

重要的特点，酵母RNA聚合酶

2005年4月1日第一卷308科学www.sciencemag.org

报告

图。 1 。 GFP的沉默nrpd1a - （一） 1 。紫外线照片gxa野生

型（ WT ）的，并nrpd1a - 1开花植物。 （二）北方分析绿色荧光蛋白

mRNA的表达和siRNA在花卉（六） ，茎（ s ）和叶（ 1 ）由WT和

nrpd1a - 1 gxa植物。 （三） Southern blot分析基因组DNA纯化

二（ 7 ） 。为nrpd1a ，地区与认同

nrpb1包括N端钳核心

（ 20 ％ ） ，锌金属结合位点，活跃

网站（ 41 ％ ） ，漏斗和部分裂隙

域（初， 42 ％ ，末位淘汰，有24 ％ ） 。该

中的裂隙域nrpa1 ，

nrpb1 ， nrpc1缺席nrpd1a

（保守区七） （图s2b ） 。然而，

C端钳核心（图s2b ） ，它定义了

年底球形域之前

C端域（ CTD是） nrpb1 （ 7 ） ，是

目前（ 23 ％相同） 。 nrpd2是34 ％相同

以nrpb2并保守区

相对应的结合位点小

核心亚基（ nrpb3/ac40 ， nrpb10 ，

nrpb12 ） （图s2d ） ，这是思想的发挥

作用于酶大会（ 7 ） 。有多重

基因nrpb3/ac40 ，有些企业

他们可以油料四的具体情况。然而，对于

nrpb10和nrpb12现在只有两个基因

每一个在拟南芥中，他们可以分享

油料之间的第四和其他的RNA聚合酶

因为他们是在其他真核生物（ 8 ） 。

最引人注目的区别

nrpb1和nrpd1a是在C端的

nrpd1 ，如水稻和拟南芥

蛋白质分享相似的C端

半数一个无编码的蛋白（有缺陷

叶绿体和叶片）规范S rRNA基因

加工叶绿体（ 9 ） （图s2a ） 。这

C端延伸，可协调的RNA

聚合酶活性与下游加工

步骤，在方式上类似于向

CTD是ofpolii （ 8 ） 。结合本

不寻常的C端与保守的特点

义RNA聚合酶表明，波兰四是

积极RNA聚合酶与重要分歧

从义RNA聚合酶的一，二和三。

来自同一组织中，作为第（二）项，消化与甲基化敏感性

酶sau96i ，摸索出为GFP的。 unmethylated G和gxa sgs3线

作为对照。 DNA片段大于554新台币，是由于DNA的

甲基化。

图。 2 。进化树

最大型的（ a ）和

第二大（二）的RNA

聚合酶亚基家庭

从植物中，蠕虫和

酵母。 itoivonthe权

对每棵树显示核糖核酸

聚合酶亚科。灰色

和黑盒子显示

拟南芥油料四亚基。

为了进一步探讨机制的油料

四介导的沉默，我们的另一个特点是

突变与迟发性GFP的沉默

（图s4a ） 。它有一个倒置4号染色体

这会破坏rdr2 （图s4b ， rdr2 - 3 ） ，以及

绿色荧光蛋白基因沉默的表型能够加以补充

通过改造与野生型rdr2

基因组DNA （图s4a ） 。在这突变，因为在

nrpd2a - 1和的每一项nrpd1a突变，有

获得较低的数额内源性24 -新台币

siRNA （即atsn1 ， 1003 ， 02 ，与第2组） ，比

在野生型，而mir167数额

未受影响（图3A ）在（ 3 ） 。这些的siRNAs都

在24新台币大小级，并dcl3 Dicer的是

参与它们的生源（ 3 ） 。这是有可能

因此，油料四， rdr2 ， dcl3法

团结起来，为一个沉默的门路。油料四将

产生的RNA的物种被复制到

双链RNA （双链RNA ） rdr2 。

这种双链RNA ，然后被加工成

小分子干扰核糖核酸由dcl3 。

该rdr2和rdp1突变，也

受长期的RNA ，由小分子干扰核糖核酸基因位点。

然而，相反的影响，对小分子干扰核糖核酸，

长期的RNA更为丰富，在沉默

突变体。因此， atsn1 RNA的更多

丰富的，在nrpd1a和rdr2突变体比

在野生型植物（图3 C ）条，显示

他们不是油料四誊本。据推测，这

RNA的结果必须由RNA聚合酶三

转录（ 10 ） atsn1是沉默

该油料四- rdr2 - dcl3通路在野生型

植物。我们无法侦测，只要油料四

誊atsn1是推测这是因为

他们目前只是非常低的数额和

都是蒙面更丰富的RNA产生

其他的RNA聚合酶。

该油料四- rdr2 - dcl3通路相关

与第2组和2002年的siRNAs并不要求

ago4或DNA甲基化（ 3 ） 。然而，

该atsn1和1003点是hypermethylated

在野生型植物相对向nrpd1a万亩

www.sciencemag.org科学卷308 2005年4月1日

报告

图。 3 。分子指标的沉默。 （一）北部的分析里9日，九仓巷10 nrpd1a - 3泳道11 ， nrpd1a - 4 lane12 ， nrpd2a - 1泳道13

内源性小RNA ：车道1日至8日， gxa （ C24为）背景车道9日至nrpd2b - 1 。污点被剥夺和reprobed成倍增长。 （二）南区

13 ，中校- O的背景。 1行，每克巷2 ， rdr2 - 3线3条和第4 ，两个分析五常rDNA的重复序列在nrpd1a一系列等位基因消化后，与

独立rdr2 - 3 rdr2p ： ： rdr2 T2合资格线巷5 ， nrpd1a -1 车道6and 7 ，甲基化敏感性酶hpaii 。 （三） RT - PCR分析的内源性

两个独立nrpd1a - 1 nrpd1ap ： ： nrpd1a T2合资格线巷8 nrpd1a - 2 atsn1誊是高架在rdr2 - 2和nrpd1a突变体。

tants （ 2 ） （图3B ）条中，并积累自己

的siRNAs是依赖于argonaute蛋白

ago4 ，从头DNA甲基转移酶

drm1 anddrm2 （五日，十一日，十二日） ，以及油料

四， rdr2 ， dcl3 。在这些例子中，它

看来，我们已建议在第pombe

（ 13 ） ，即维持沉默涉及

自我强化沉默通路在其中

油料四介导的siRNA生产是依赖

关于ago4介导的DNA甲基化

反之亦然。

theroleofpol四所述herecould

解决的一个悖论染色质沉默

机制是依赖于RNA的。如果

该沉默的基因转录是由一个单一的

聚合酶，这种RNA依赖的机制

不会稳定，因为镇压

转录从这些位点

也将导致亏损沉默的RNA 。

然而，沉默特异性聚合酶像

油料四，可耐染色质或DNA

修改影响聚合酶一至三

等，可以稳定地保持沉默

状态。在动物和真菌的油料四分支

缺席的，但沉默的悖论可能

解决了，如果有形式的核糖核酸

聚合酶一至三与沉默-具体

亚基，使转录的异染色质

，因此，维修

该RNA依赖的沉默。

最后一点，一般约沉默

机制是说明了GFP的跨

基因沉默与内源性24新台币的siRNA

沉默的通路都是依赖

对共和联盟蛋白质（图1018 ） 。在玫瑰叶子

该植物的，这两个沉默途径

是相互独立的，因为跨

基因沉默是不受rdr2 （图1018 ）

由于内源性24nt的siRNA坚持

在rdr6植物（ 2 ） 。然而，在这些花朵

通路是相互依存的，因为绿色荧光蛋白

沉默是受两rdr2和rdr6 。

这种潜在的沉默通路互动，

结合自己的能力，以形成

反馈和自我加强的循环（ 14 ） ，说明

潜在的复杂性内源性

监管网络涉及的siRNAs 。

参考文献及债券

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baulcombe ，细胞101 ， 543 （ 2000 ） 。

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12 。四zilberman ，十曹时，雅各布森，科学， 299 ， 716

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science.1079695 ） 。

13 。汤匙杉山爱，每小时

凸轮，甲弗德尔，四莫阿塞德，第行列

grewal ，过程。 natl 。 acad 。工商局局长。美国102 ， 152 （ 2005 ） 。

14 。四baulcombe ，性质， 431 ， 356 （ 2004 ） 。

15 。作者承认资金来自盖茨比

慈善基金会，生物技术和生物

科学研究委员会，以及婴儿，校

威康基金（ a.j.h. ）以及技术

援助的影响。

支持在线材料

www.sciencemag.org/cgi/content/full/1106910/dc1

材料与方法

无花果。中一至中四

表S1和S2

参考文献及债券

2004年10月29日接受， 2005年1月25日

在网上公布2005年2月3日

10.1126/science.1106910

包括这方面的资料时，引用这个文件。

平移算子的基因

对核糖体：如何抑制物

蛋白质排除核糖体约束力

lasse詹纳， 1帕斯卡romby ， 2伯纳德里斯， 1

克莱门斯舒尔策- briese ，三是学生，施普林格， 4 chantal ehresmann ， 2

伯纳德ehresmann ， 2人Dino moras ， 1 gulnara yusupova ， 1

赛yusupov1 ， 2 *

核糖体的热嗜热是cocrystallized与发起人转让

核糖核酸（ tRNA分子）和一个结构完整信使核糖核酸（ mRNA的）携带一个平移

运营商。道路mRNA的定义是在5.5埃决议

它比较，无论是与晶体结构相同的核糖体复杂

缺乏表达或联同非结构化mRNA的表达。一个确切核糖体环境

岗位操作者的茎环结构垂直于表面的

核糖体在该平台上的30年代亚基。有约束力的操作者和

首倡者的tRNA发生于核糖体与一个无人居住的tRNA撤离现场，

这是预期为起始复杂。定位监管

域的经营者相对核糖体阐明了分子

机制，即约束抑制物开关过翻译。我们的数据

建议一般以何种方式表达控制元素必须放在了

核糖体，以履行自己的监管任务。

起始翻译一般认定时，应变能力快的需要。有约束力的

效率促进蛋白质的合成，是eubacterial核糖体涉及的几个要素

关键的一步，为控制基因表达的基因，其中影响动力学的研究

2005年4月1日第一卷308科学www.sciencemag.org

希望能和你成为朋友

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