空谷临风
病毒进化
该文章仅适合伯乐(BIO-RAD)仪器的qPCR实验及数据分析
荧光定量(qPCR)程序运行
创建一个新的程序,或者选已经创建好的文件,下一步
选择正确的板子类型,下一步
直接点击Start Run
数据分析
1 使用伯乐的CFX Maestro软件直接查看
选择Gene Expression——Plate Setup——view plate
选中PCR孔,
Target Names是组名填基因的名字或者是管家/内参基因(Actin)
Sample Names填样品的名称
关掉表格,选择是
选择Actin作为内参基因,点击OK
就可以用软件查看基因表达量了。
2 将运行的结果导出,用GraphPad展示
将下边这部分数据导入到GraphPad
选择Mean &SEM
将Expression的数据填入Mean列,将Corrected Expression SEM填入SEM列
点击表格对应的Graphs。
ct,是从基线到指数增长的拐点所对应的循环次数,仪器中给出的ct就是你每个孔实际的ct值ct mean,是你相同样品的几个重复的CT值得平均值
如果是做的相对定量,用CTmean的结果就可以了,计算方法就是R=2-ΔΔCt,现在很多仪器你只要设置的时候明确标出内参基因和目的基因,这个结果也是会有自带软件给计算出来的。
如果你是做绝对定量,那更方便,你只要在仪器设置的时候把你的标准品含量依次输入,最后软件会自动生成标准曲线什么的,你最后只要分析og sq的结果就可以了。
欢迎分享,转载请注明来源:夏雨云
评论列表(0条)