有谁知道如何制作生物组织切片啊

专业的实验室可能会有专门的生化切片机。看你天真无邪的样子应该接触不到那东西。所以只能用刀片自己切，沿着横截面按住刀片划下一片。后然后放在载玻片上洗净，盖上盖玻片。稍稍按压。然后就可以放显微镜下了。如果切得不薄是看不到的。所以这个考验技术了。一般是失败的。

肠道的石蜡切片的制作

（1）

取材：用锋利的刀切取罗非鱼的一小段前肠（据胃5cm左右位置的前肠），组织块的规格为

3～5mm×3～5mm×10～15mm。

（2）

固定：采用Bouin氏固定液装瓶固定，固定液用量一般为组织块体积的10～20倍。

（3）

冲洗：固定12～24h后，将材料自固定液中取出后，在70%酒精中换洗几次，可在酒精中加几滴氨水至洗去黄色为止。

（4）

脱水：70%酒精（1h）→80%酒精（1h）→90%酒精（1h）→95%酒精（1h）→无水乙醇Ⅰ（1h）→无水乙醇Ⅱ（1h）

（5）

透明：无水乙醇与二甲苯溶液（1:1）（1h）→二甲苯Ⅰ（1h）→二甲苯Ⅱ

（1h）

（6）

浸蜡：浸蜡的全过程应在恒温设备中进行，将恒温箱调至58℃。

二甲苯与石蜡混合液（1:1）（1h）→石蜡Ⅰ（1h）→石蜡Ⅱ（1h）

浸蜡必须彻底，否则组织内残留透明剂会造成切片过程的困难和影响切片

的质量。

（7）

包埋：在小纸盒内注入溶化的石蜡，将已浸蜡的组织块置入其内，使蜡块迅速冷却硬固，组织块在蜡块中可长期保存。

（8）

切片：包埋后的组织块经修整后，用切片机切成5~7μm的石蜡带。

（9）

粘片：将组织石蜡带在50摄氏度的温水中展片，然后用经1%HCl溶液处理干净的载玻片捞片，组织带即可粘在载玻片上。

（10）

烤片：将粘好的载玻片置于35℃左右的温箱中烤干，待2~3小时后，即可取下编号。

（11）

苏木精—伊红染色：将烤干的片进行染色。

①脱蜡：将烤干的切片放入二甲苯(I)10min→二甲苯(Ⅱ)10rain。

②复水：将脱蜡后的切片移入100％酒精5min→95％酒精5min→85％酒精5min→70％酒精5min→蒸馏水5min

③HE染色显示肠道黏膜上皮内淋巴细胞：将蒸馏水洗涤后的切片移入Harris苏木精液中，10min，使细胞核着色；用自来水洗去切片上残余染液；用1％的盐酸酒精分色3秒；用自来水浸洗3h，显微镜下观察，直到胞核蓝化为止；然后切片入曙红溶液中染色5min，使细胞质着色。经95％酒精与100％酒精脱水，二甲苯透明后，中性树胶封片。

④奥新兰一沙黄染色显示肠道内肥大细胞：切片常规脱蜡下行至蒸馏水→奥新兰一沙黄液染色15～20min→蒸馏水速洗，镜检→95％和100％酒精分色脱水1—2min→二甲苯透明→中性树胶封片。

⑤阿利新兰醋酸染色显示肠道内杯状细胞：切片经脱蜡下行入蒸馏水→阿利新兰醋酸染色10min→蒸馏水洗→1％高碘酸水液氧化5min→蒸馏水略洗一Schiff试剂染色（37℃恒温箱）30min→普通水洗3次→蒸馏水2min→Ehrlich苏木精染色5min→95％酒精和100％酒精脱水→二甲苯透明，中性树胶封片。

切片经脱蜡下行入水：二甲苯(30

min)一二甲苯(10

min)一无水乙醇(5

min)一无水乙醇(5

min)一

95％

乙醇(5

min)一85％乙醇(5

min)一70％

乙醇(5

min)一流水冲洗(20

min)。人Ehrlich苏木精染

色12

min，蒸馏水速洗。盐酸酒精分色，镜检控制时间。入伊红染色2

min，蒸馏水略洗。盐酸酒精分色，镜检控制时间。经95％酒精与无水酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。

阿利新兰—番红复合染色液的方法称Scaba法

阿利新兰—番红分别染色的方法称Spicer法

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