要对细菌做SEM,前处理是什么?需要把细菌弄成干态或者固定是吗?求详细的步骤

要对细菌做SEM,前处理是什么?需要把细菌弄成干态或者固定是吗?求详细的步骤,第1张

取样,戊二醛等固定液固定,酒精梯度脱水,冷冻干燥or二氧化碳临界点干燥,喷金或蒸碳。

以上四个步骤,根据所使用的SEM成像的真空模式,可以有所省略。

如果用ESEM,取样后可直接放入样品室,在一定“环境真空”下进行观察;如果采用LV模式,直到干燥,可以免喷金;高真空模式,必须做到喷金等样品导电处理。

具体可到公益网站:中山大学生物电子显微学实验室网站查询

扫描电镜样品制备: 基础课程,生物样品因含水,其样品制备有其特殊性。

http://bioem.sysu.edu.cn/wiki/index.php/%E9%A6%96%E9%A1%B5

有时候公益网站有点那个,不好点开,请看转载链接http://coxem2010.blog.163.com/blog/static/16510375720114192413945/

将溶解好的海藻酸钠溶液加入溶解好的明胶水溶液,将两种溶液按一定比例共混,脱泡、减压脱泡后,在室温条件下于凝固浴中以湿法纺丝制备海藻/明胶纤维,该共混纤维具有较高的生理活性、优良的力学性能和吸水率,在医疗领域具有广泛的应用前景,尤其适用于制造无纺布作伤口敷料。 海藻酸微溶于水,不溶于大部分有机溶剂。它溶于碱性溶液,使溶液具有粘性。海藻酸钠粉末遇水变湿,微粒的水合作用使其表面具有粘性。然后微粒迅速粘合在一起形成团块,团块很缓慢的完全水化并溶解。如果水中含有其它与海藻酸盐竞争水合的化合物,则海藻酸钠更难溶解于水中。水中的糖、淀粉或蛋白质会降低海藻酸钠的水合速率,混合时间有必要延长。单价阳离子的盐(如NaCl)在浓度高于0.5%时也会有类似的作用。海藻酸钠在1%的蒸馏水溶液中的pH值约为7.2。 稳定性 海藻酸钠具有吸湿性,平衡时所含水分的多少取决于相对湿度。干燥的海藻酸钠在密封良好的容器内于25℃及以下温度储存相当稳定。海藻酸钠溶液在pH5~9时稳定。聚合度(DP)和分子量与海藻酸钠溶液的粘性直接相关,储藏时粘性的降低可用来估量海藻酸钠去聚合的程度。高聚合度的海藻酸钠稳定性不及低聚合度的海藻酸钠。据报道海藻酸钠可经质子催化水解,该水解取决于时间、pH和温度。藻酸丙二醇酯溶液在室温下、pH3~4时稳定;pH小于2或大于6时,即使在室温下粘性也会很快降低。 免疫原性和生物相容性 海藻酸钠是一种天然、生物能降解的生物高聚物。海藻酸钠中发现的化学成分和促有丝分裂的杂质是海藻酸盐钠具有免疫原性的主要原因。很多报道显示植入海藻酸钠会产生纤维化反应。据知海藻酸钠可能含有热原、多酚、蛋白质和复杂的碳水化合物。多酚的存在很可能对固定化细胞有害,而热原、蛋白质和复杂的碳水化合物会诱使宿主产生免疫反应。 Yang S用新的交联方法制备了明胶/海藻酸钠复合物类的可吸收海绵体。对其进行SEM观察发现,海绵基本是均匀的,且证明形态取决于明胶/海藻酸钠比例,与交联度无关。虽然发生了交联反应,海绵在胶原酶的生理盐水缓冲液中仍可降解。 海藻酸/胶原共混纤维生物相容性好,粘附性强,具有促进伤口愈合的活性功能及止血功能,具有较好的药物及生长缓释作用,可与局部抗菌药物组合制成基因工程敷料用于感染创面;也可与活性生长因子或活性细胞组合制成基因工程敷料用于顽固性溃疡及烧伤创面;无菌、低过敏原、无毒、无热源。 海藻酸/(胶原)明胶纤维的强度是利用Ca++交联及其之间的聚电解质效应而得到的。海藻酸钠能与Ca++络合形成水凝胶,主要反应机理为G单元与Ca++络合交联,形成蛋盒(egg-box)结构,G基团堆积而形成交联网络结构,转变成水凝胶纤维而析出。酸浴的主要作用是得到-NH3+,因为在制备纺丝液时,需要调节(胶原)明胶的pH值为弱碱性,目的是屏蔽掉(胶原)明胶的-NH3+,避免(胶原)明胶与海藻酸钠形成凝胶沉淀,提高二者的相容性;而纺制成纤维后在酸浴中将 (胶原)明胶的-NH2转变成为-NH3+,NH3+与-COO-产生聚电解质效应,提高纤维之间的交联度,提高了纤维的断裂强度。


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