如何用imagej分析免疫组化平均光密度值

1、打开Image-Pro Plus 6.0软件，点击右下方的Done。点击file，点击open，打开你要选择组化图片，点击打开，得到如图所示。

2、点击file那一排的measure，选择calibration右侧下方的intensity。点击OD旁边的new，点击std. optical density，点击options，

3、点击255旁边的image，弹出如图所示对话框，点击图中空白地方，点击ok键。将incidental level改成255。

4、继续点击ok，点红色x，关闭。点击measure→count/size。

5、点击selecte colors，点击最左边像笔的图标，选免疫组化图片阳性蛋白表达区域，选择完毕，点击close。

6、点击表格中的view，选择statistic。得到mean那一栏和iod交叉的数值，就是mean of iod。

下载并打开ImageJ软件。

导入WB条带图片：File→Open→找到WB条带。

把图片转化成灰度图片：Image→Type→8-bit。

消除图片背景的影响：Process→SubtractBackground，在弹出的对话框中，填上50基本就可以了，并勾上Lightbackground，点击OK。此时图片背景会变白一些。设置定量参数：Analyze→SetMeasurements。在弹出的对话框中勾选Area、Meangrayvalue、Min&maxgrayvalue、Integrateddensity。设置单位：Analyze→SetScale。在弹出的对话框“Unitoflength”后面填上“pixels”，其他的不用改动。把WB图片转换成亮带：Edit→Invert。选择菜单栏下的不规则圆形工具，将圆圈手动拉倒第一条带，并尽量将条带都圈起来。当测定完所有条带，选结果中的“Edit”的“SelectAll”，然后复制数据“IntDen”到Excel表即可进行分析。也可以直接在Results对话框中，选择File→Saveas，直接导出excel表格。

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