上一篇已经说到凝胶成像系统有三大件,暗箱,相机与电脑上的控制分析软件。就按这个顺序说吧。
暗箱里是四组照片灯光。最常用的是透射紫外灯箱与透射白光板。作过凝胶电泳的同学都用过紫外灯箱,暗箱里也是这东西。紫外灯箱是观察EB染色的核酸电泳的。白光板则用来拍摄SDS PAGE凝胶。
图片:紫外灯箱。注意暗箱后壁上还有块板可以拉下来,那就是白光板。
图片:其实白光板与医院里看X-光片的灯箱是一个道理。看SDS PAGE凝胶就得放在这个上面。放在桌子上自己用数码相机拍张照片是不行的。
1.凝胶要拍大一点,让它充满画面。
2.曝光不能过度。这会导致条带的分析产生错误。此时最亮的条带会呈现为一个大白斑。
3.加样孔放在上面,凝胶块要摆得横平竖直。如果是竖长条的凝胶,也可以横着拍摄,然后用旋转图片的方法把加样孔转到上方。
4.图片要以12位灰度甚至16位灰度保存为TIFF格式。不能存为jpeg图片。下面图片上的那些马赛克就是gpeg惹的祸。
各种凝胶成像系统的具体操作方法当然是不同的,不过它们都是下面这个程序:
1.放入凝胶块,调整其位置,(在后面的过程中还需要细调其位置让它处在画面中间)
2.关上门,打开相对应的灯光。(手控的光源开关在暗箱上,程序控制的在软件的暗箱控件模块上)
3.调整相机镜头的光圈及曝光时间以调整图像亮度,变焦调整图像的放大与缩小,让凝胶图像尽量充满整个画面。还有个对焦距的功能,使图像清晰。
4.拍摄照片。要保存为TIFF图片格式,如果相机够好,还能保存为12位灰度的图片文件。
扫描电镜检测是材料微观形貌观察必不可少的研究手段,但水凝胶材料由于含有大量水分或有机溶剂,无法直接放入电镜中观察。电镜工作需要维持高真空环境,而水分在真空中会迅速挥发,导致图像异常甚至电镜故障。因此,对于水凝胶样品,通常需要进行冷冻干燥处理,将水分去除后再进行拍摄。
BIO-RAD凝胶电泳成像系统的操作方法1.接通电源和照相机电源
2.打开开关,预热30分钟
3.打开软件,文件菜单中gel-doc.xr
4.按live/focus,30s后按autoexpose or manualexpose
5.调iris,zoom ,focus调节图像清晰度,之后按freeze拍照,保存。
BIO-RAD 凝胶成像系统 Universal Hood Ⅱ
仪器性能:
拍摄对象:核酸琼脂糖凝胶电泳
X光胶片
软件功能:获取并处理图像
测定图像光密度
操作步骤:
1. 开启成像系统,电脑电源
2. 打开Quality One软件,调整光源所示图像
3. 观察并调整曝光时间,获得图像并保存
4. 调整图像,并对图像进行光密度分析
5. 关闭所有电源
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