要对细菌做SEM，前处理是什么？需要把细菌弄成干态或者固定是吗？求详细的步骤

取样，戊二醛等固定液固定，酒精梯度脱水，冷冻干燥or二氧化碳临界点干燥，喷金或蒸碳。

以上四个步骤，根据所使用的SEM成像的真空模式，可以有所省略。

如果用ESEM，取样后可直接放入样品室，在一定“环境真空”下进行观察；如果采用LV模式，直到干燥，可以免喷金；高真空模式，必须做到喷金等样品导电处理。

具体可到公益网站：中山大学生物电子显微学实验室网站查询

扫描电镜样品制备: 基础课程，生物样品因含水，其样品制备有其特殊性。

http://bioem.sysu.edu.cn/wiki/index.php/%E9%A6%96%E9%A1%B5

有时候公益网站有点那个，不好点开，请看转载链接http://coxem2010.blog.163.com/blog/static/16510375720114192413945/

细菌和真菌的分布

作为自然界中微生物的细菌和真菌是我们肉眼看不见的，必须借助于一定的器械（显微镜），但是它们又是无处不在的。未了弄清楚它们的分布情况，特进行探究：

1、实验中要选取五套培养皿进行实验，一个做为对比，另外四个用来培养不同环境中的细菌，并且是在不同的环境中培养，以便得出细菌和真菌的生存条件。

2、实验所使用的培养皿要经过高温灭菌（让学生想一想是为什么），并且每一组的培养皿要在相同的环境条件下培养。也即是说要准备至少5套培养皿（每一个小组）。因为对比不同环境中的细菌与真菌的存在情况，是属于单因素比较，所以除了采样地点是变量外，进行微生物培养的条件等也要保持一致（温度、湿度等）。

3、经过高温处理后可以将培养皿上、培养基内混有的细菌或真菌的孢子等杀死（经过严格的高温灭菌的环境中是不可能有细菌和真菌存在的），这样就排除了实验外其他环境的污染。因此，在实验前不要盲目的打开培养皿，以防止细菌或真菌的孢子等落在培养基上，实验中用无菌棉棒的目的同样是为了防止棉棒上的微生物污染培养基。也就是说在接种的时候要注意污染。

4、在不同的环境中细菌的分布是不相同的，因此在采集菌种的时候要注意选择环境，做到要有一定的代表性。

5、接种好的培养基要放在特定的环境条件下进行培养。

（将对照组放在一定的环境中培养，将另外四组放在四个不同的环境中进行培养，以便研究细菌和真菌的生存条件，同时也可以思考我们在生活中用什么方法来防止细菌和真菌的污染；尤其是医院又以什么为标准来判断。）

6、在检测不同环境中的细菌和真菌时，每一个小组的成员要作好分工，以保证在规定的时间内做好观察与记录。同时也便于小组成员间的相互讨论以及小组之间的讨论。（分析细菌和真菌的生存环境，分布范围，多少等等）。

菌落总数检测一般步骤为：

采样 — 样品制备与稀释 — 倒平板 — 涂布平板 — 倒置培养 — 菌落计数 — 计算菌落总数

样品制备，需要对样品进行均质，根据客户需要检测的样品不同。WIGGENS提供不同的均质设备，如均质机，拍打式均质器等；

样品的稀释，国标中采用1:10的十倍稀释方法，SOCOREX提供各种手动精密移液器，瓶口分液器，移液管控制器为液体操作提供了保证。

倒平板，使用的培养基为含有琼脂的固体培养基。培养基在配备的过程中需要经过煮沸和保温的步骤。WIGGENS红外加热磁力搅拌器，直接使用红外辐射方式进行加热，1L培养基只需要10分钟即可煮沸，极大节约了客户培养基制备时间。在倒平板之前，需要恒温培养基46±1 ℃， WIGGENS恒温水浴锅，可以为用户提供的温度控制和恒温条件；

涂布平板，培养基在培养皿中冷却成固态之后，将稀释后的样品用移液器取1mL,滴到培养基表面，用涂布棒涂匀。WIGGENS有专用的培养皿转盘，可以有效的将样品液均匀的涂布在培养基表面。

倒置培养，将涂布完毕的平板，放入恒温培养箱中进行培养，一般培养时间约为48h。WIGGENS恒温培养箱内容积50-140L各种规格的台式及落地式培养箱，先进的设计及数据接口，可以直接通过电脑编程控制及信息处理，非常适合规范化培养要求。

菌落数计算，经过48小时的培养之后，在培养基表面会长出菌斑，每个菌斑代表一个微生物。一般在培养皿中菌落数为30-300个之间，为有效菌落数。低于30个，会因为样本量不足，随机性大；超过300个，会因为菌落数太多，过于密集产生菌斑重叠等现象，不利于准确计数。WIGGENS菌落计数器，是带有非闪烁式环形光源，放大镜，压力传感器，计数笔等，可以让使用者轻松计数。

计算菌落总数，培养皿中的菌落数需要通过公式换算。 WIGGENS菌落计数器，配套软件可以直接通过压力传感器进行培养皿中菌落计数，通过软件内嵌程序直接计算出被检测样品中菌落总数。

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