sem前处理脱水目的

sem前处理脱水目的：脱水至无水状态，为减缓其挥发速度，退回至85%脱水剂，取出，空气中自然干燥。

优点：脱水剂为低表面张力物质，挥发过程中减少了样品的收缩及损伤

缺点：常常使样品发生变形收缩

适用范围：铸型或体表比较坚硬的甲壳昆虫等含水量较少的样品

生物实验：植物细胞的吸水和失水

一、实验目的：

1、学会使用显微镜观察植物细胞质壁分离和复原。

2、观察不同浓度的溶液对细胞吸水失水的影响，掌握此种方法的具体应用。

3、通过观察植物细胞的吸水和失水，明确渗透系统的组成以及具体应用。

二、实验原理：

1、成熟的植物细胞放到一定浓度的溶液中构成一个渗透系统。当细胞大量失水时原生质层与细胞壁的伸缩程度不同，导致原生质层和细胞壁分离。

2、当外界溶液浓度大于细胞液浓度时，根据扩散作用原理，水分会由细胞液中渗出到外界溶液中，通过渗透作用失水；由于细胞壁和原生质层的伸缩性不同，细胞壁伸缩性较小，而原生质层性较大，从而使二者分开；反之，外界溶液浓度大于细胞液浓度，则细胞通过渗透作用吸水，分离后的质和壁又复原。

三、实验材料：紫色特别深的洋葱外表皮、质量浓度为0.3g/ml的蔗糖溶液、清水

四、实验用具：显微镜、镊子、刀片、载玻片、盖玻片、滴管、吸水纸

五、方法步骤：

1、用刀片在洋葱鳞片叶的外表面划一个小方块，用镊子撕取这一小块洋葱表皮，在洋葱的外表皮上，用刀片划一些方块，用镊子轻轻撕取一小块（撕取的仅仅是外表皮，不要撕得太厚，仍然作为一个问题留给学生）。在取标本时，可以将洋葱的内表皮朝外，外表皮朝里进行对折，不要太用力，然后取其外表皮作为材料，将它平展地放在载玻片中央的清水滴中，并盖上盖玻片。

2、用低倍镜观察洋葱表皮细胞中紫色的中央液泡大小，以及原生质层的位置。

3、从盖玻片的一侧滴入0.3g/ml的蔗糖溶液，在盖玻片的另一侧用吸水纸吸引。这样重复几次，洋葱表皮细胞就侵润在蔗糖溶液中。注意重复3-4次。

4、再用低倍镜观察洋葱表皮细胞中紫色的中央液泡大小，以及原生质层的位置。

5、从盖玻片的一侧滴入清水，在盖玻片的另一侧用吸水纸吸引，这样重复几次，洋葱表皮细胞就侵润在清水中。

6、还用低倍镜观察洋葱表皮细胞中紫色的中央液泡大小，以及原生质层的位置。

六、实验结论：

当外界溶液浓度大于细胞液浓度时，水分会由细胞液中渗出到外界溶液中，通过渗透作用失水；由于细胞壁和原生质层的伸缩性不同，细胞壁伸缩性较小，而原生质层性较大，从而使二者分开；反之，当外界溶液浓度低于细胞液浓度时，则细胞通过渗透作用吸水，分离后的质和细胞壁又复原。

答：透射电镜生物标本制备过程⑴取材⑵固定:保持细胞内部结构不改变。（戊二醛：在蛋白质分子之间形成共价键, 将它们交联在一起。四氧化锇：除与蛋白共价结合外,还对脂类有良好的固定效果。）脱水：标本必须置于高真空中进行电镜观察,所以电镜生物标本不能含水。梯度乙醇。包埋: 为使柔软生物组织制成超薄切片（良好支撑）,并使切片耐受高真空、电子轰击，应在切片前将标本进行包埋,常用环氧树脂。切片:电子穿透力很弱,需将样品制成40～50nm厚薄片。约为细胞的1/200厚度。染色:生物分子由原子序数低的轻元素组成，它们散射电子能力弱,在电镜下几乎不存在明暗反差,需加大生物样品反差,进行染色。重金属浸染。

(透射电镜样品提高反差的方法:⑴负染法⑵ 冰冻蚀刻)扫描电子显微镜标本制备：取材、清洗、 固定、干燥、镀膜因为电镜观察所制备的的标本都是将细胞脱水后的死标本，所以不能观察活性标本~

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