如何看QRT-PCR 结果中的Cq值

这样算：

你先把几次试验的对照组的平均值设为1, 再把每个单独试验对照组的数值算出和这个对照组平均值的差异，就可以计算标准差了。

这么简单的统计分析，用不着SPSS吧， excel就可以解决了。

追问 : 谢谢您，可是我还是有点不明白：如果我重复三次，每次3个复孔（即一共9个孔），您指的“把几次试验的对照组的平均值设为1”是指把对照组的ΔCT还是ΔΔCT还是2的-ΔΔCT的平均值设为1啊？谢谢！

追答 : 首先，你重复做一个样本（3个重复的孔），那只能算一个值（取平均）。 我说的1是指的相对表达量，不是ΔCT。你得到每个样本中目的基因和内参的CT值后，就可以算出相对表达量了，对不对？ 这时，取所有对照组的平均值，设为1. 每次实验的对照组再和这个平均值1比较，就是对照组的标准差了。

追问 : 您所说的目的基因和内参的CT值相减得到的不就是ΔCT吗？假设三次实验某一基因的对照组的均值为4，5，6，则均值为5，此时把5设为1，然后再怎么算啊？不好意思麻烦您再解答一下，非常感谢

追答 : 按照你说的，5为平均值，那三个组分别和5比较，不就是-1， 0， 1三个值吗。得到的相对表达量就是0.5， 1 和2. 不管是CT值还是表达量，你都可以算出标准差，做出error bar了。

追问 : 我知道了，可是这样出来的error bar好大啊，给人感觉误差会很大呀

追答 : 这个error bar反应的是真实的差异啊，怎么会给人误差很大的感觉呢，我只是举了个例子，实际上你只要加样量控制的好，对照组的误差都是很小的。不会出现4， 5， 6这样的差异，一般都是在小数点后的差异

一、原理

在指数阶段，PCR 产物的量在每个循环中大约增加一倍。然而，随着反应的进行，反应组分被消耗，最终一种或多种组分变得有限。此时，反应减慢并进入平台期。

最初，荧光保持在背景水平，即使产物以指数方式累积，也无法检测到荧光的增加。最终，足够的扩增产物积累以产生可检测的荧光信号。

发生这种情况的循环数称为量化循环，或 q。由于 q值是在试剂不受限制的指数阶段测量的，因此可以使用实时 qPCR 根据描述反应进程的已知指数函数可靠和准确地计算反应中存在的模板的初始量。

反应的 Cq主要由扩增反应开始时存在的模板量决定。如果在反应开始时存在大量模板，则需要相对较少的扩增循环来积累足够的产物以产生高于背景的荧光信号。因此，反应将具有低的或早期的 Cq。

二、应用

实时荧光定量 PCR/qPCR 检测已成为快速、灵敏地测定和定量各种生物样品中核酸的首选工具，具有多种应用，例如基因表达分析、食品中转基因生物的检测和癌症表型分析.

在研究实验室中，qPCR 测定广泛用于定量测量转化细胞系中的基因拷贝数（基因剂量）或突变基因的存在。与逆转录 PCR (RT-PCR) 相结合，qPCR 分析可用于精确定量基因表达的变化，例如，通过测量细胞的变化，响应不同环境条件或药物治疗的表达增加或减少mRNA水平。

qPCR/实时 PCR 仪器

实时 PCR 检测系统由配备光学检测模块的热循环仪组成，用于测量每个扩增循环期间荧光团与目标序列结合时产生的荧光信号。

Bio-Rad 实时 PCR 检测系统具有热循环仪和可互换的模块，用于荧光团的单重和多重检测以及固定的实时 PCR 单元。所有 qPCR 系统都具有热梯度功能。

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