要对细菌做SEM,前处理是什么?需要把细菌弄成干态或者固定是吗?求详细的步骤

要对细菌做SEM,前处理是什么?需要把细菌弄成干态或者固定是吗?求详细的步骤,第1张

取样,戊二醛等固定液固定,酒精梯度脱水,冷冻干燥or二氧化碳临界点干燥,喷金或蒸碳。

以上四个步骤,根据所使用的SEM成像的真空模式,可以有所省略。

如果用ESEM,取样后可直接放入样品室,在一定“环境真空”下进行观察;如果采用LV模式,直到干燥,可以免喷金;高真空模式,必须做到喷金等样品导电处理。

具体可到公益网站:中山大学生物电子显微学实验室网站查询

扫描电镜样品制备: 基础课程,生物样品因含水,其样品制备有其特殊性。

http://bioem.sysu.edu.cn/wiki/index.php/%E9%A6%96%E9%A1%B5

有时候公益网站有点那个,不好点开,请看转载链接http://coxem2010.blog.163.com/blog/static/16510375720114192413945/

细菌标本片的制备,实际上真没这必要,我一般碘酒,或者溴酚蓝滴上一染,盖上玻片就看了。

1.抹片

(1)固体培养物:取洁净的玻片一张,把接种环在酒精灯火焰上灼烧灭菌后,取1-2环无菌生理盐水,放于载玻片的中央,再将接种环灭菌,冷却后,从固体培养基上挑取菌落或菌苔少许,与水混匀,作成直径1cm的涂面。接种环用后需要灭菌。

(2)液体培养物:可直接用灭菌接种环钩取细菌培养液1-2环,在玻片上作直径1cm涂面。

(3)液体病料(血液,渗出液,腹水):取一张边缘整齐的载玻片,用一端蘸取血液等液体材料少许,在另一张洁净的玻片上,一45°角均匀推成一薄层的涂面。

(4)组织病料:以无菌剪刀、镊子剪去被检组织一小块,以其新鲜切面在玻片上做3-5个压印或涂抹成适当大小的一薄层。

无论何种方法,切忌涂抹太厚,否则不利于染色和观察

2.干燥

涂片应在室温下自然干燥,必要时将涂片涂面向上,置于火焰高处微加热干燥。

3.固定

(1)火焰固定。是常用的方法,将干燥好的抹片涂面向上,在火焰上来回通过数次(4-6次),以手背触及玻片微烫手为宜。

(2)化学固定。有的血片,组织触片用姬姆萨染色时,要用甲醇固定3-5min

二、常用的细菌染色法

1.美蓝染色法:在经火焰固定的涂片上,滴加适量美兰染色液覆盖涂面,染色2-3min,水洗,晾干或吸水纸轻压吸干镜检,结果,菌体呈蓝色

2.革兰氏染色法。

(1)在固定好的抹片上,滴加草酸铵结晶紫染色液,染1-3min,水洗

(2)加革兰氏碘液媒染,作用1-2min,水洗

(3)加95%酒精脱色约30s至1min,水洗

(4)加稀释石碳酸复红或沙黄水溶液复染30s左右,水洗,吸干后镜检

3.瑞氏染色法

细菌抹片自然干燥后,滴加瑞士染色液于涂片上以固定标本,1-3min后,再滴加与染色液等量的磷酸盐缓冲液或中性蒸馏水与玻片上,轻轻摇晃使染色液混合均匀,5min左右水洗,干后镜检,菌体呈蓝色,组织细胞的胞浆呈红色,细胞核呈蓝色

4.姬姆萨染色法。血片或组织触片自然干燥后,用甲醇固定3-5min,干燥后在其上滴加足量染色液或将抹片浸入盛有染色液的缸里,染色30min,或者染色数小时或24h,取出水洗,吸干或烘干,镜检。细菌呈蓝青色,组织细胞浆呈红色,细胞核呈蓝色

制作微生物玻片标本通常采用涂片法,微生物包括细菌和真菌(或包括病毒),细菌个体小,通常用涂片法制作玻片标本。涂片法是装片法制作玻片标本的一种方法。制作方法是,细菌可以用细菌液直接涂布在载玻片上,盖上盖片直接观察或干燥后染色观察,染色观察通常需要洗去染色液后观察。制作真菌标本可以采用涂片法、撕片法、贴片法和切片法,单细胞或孢子或菌丝采用涂片法,大型真菌有较大的组织块,可以采用撕片法(如撕取一部分蘑菇丝)、贴片法(将蘑菇的菌褶贴到载片上)和切片法(切片的方式观察蘑菇的结构)。

制作植物玻片标本方法很多,根据材料不同和观察目的不同采用不同方法。涂片法(观察果实营养组织,如西瓜瓤)、撕片法(观察洋葱表皮、观察导管)、切片法(观察组织、器官结构)、磨片法(坚硬的果核磨成薄片观察)。

切片法分为徒手切片、冰冻切片和石蜡切片等方法。


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