什么是胶体金法

金溶胶又称胶体金，是金盐被还原成金单质后形成的稳定、均匀、呈单一分散状态悬浮在液体中的金颗粒悬浮液。金溶胶颗粒由一个金原子及包围在外的双离子层构成。

溶胶的颜色取决于分散相物质的颜色、分散相物质的分散度和入射光线的种类，是散射光线还是透射光，粒子越小，分散度越高，则散射光的波长越短。对同一种物质的水溶胶来说，粒子大小不同，呈现的颜色亦不同。

如胶体金颗粒在5～20nm之间，吸收波长520nm，呈红色的葡萄酒色；20～40nm之间的金溶胶主要吸收波长530nm的绿色光，溶液呈深红色；60nm的胶体金溶胶主要吸收波长600nm的橙黄色光，溶液呈蓝紫色。一般应用于免疫组织化学的胶体金颗粒为5～60nm范围内，溶液呈现红色。

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扩展资料：

常用的免疫胶体金检测技术：

1、免疫胶体金光镜染色法细胞悬液涂片或组织切片，可用胶体金标记的抗体进行染色，也可在胶体金标记的基础上，以银显影液增强标记，使被还原的银原子沉积于已标记的金颗粒表面，可明显增强胶体金标记的敏感性。

2、免疫胶体金电镜染色法可用胶体金标记的抗体或抗抗体与负染病毒样本或组织超薄切片结合，然后进行负染。可用于病毒形态的观察和病毒检测。斑点免疫金渗滤法

3、应用微孔滤膜（如膜）作载体，先将抗原或抗体点于膜上，封闭后加待检样本，洗涤后用胶体金标记的抗体检测相应的抗原或抗体。

4、胶体金免疫层析法将特异性的抗原或抗体以条带状固定在膜上，胶体金标记试剂（抗体或单克隆抗体）吸附在结合垫上，当待检样本加到试纸条一端的样本垫上后，通过毛细作用向前移动。

溶解结合垫上的胶体金标记试剂后相互反应，当移动至固定的抗原或抗体的区域时，待检物与金标试剂的结合物又与之发生特异性结合而被截留，聚集在检测带上，可通过肉眼观察到显色结果。该法现已发展成为诊断试纸条，使用十分方便。

参考资料来源：/baike.baidu.com/item/%E9%87%91%E6%BA%B6%E8%83%B6"target="_blank"title="网页链接">百度百科——金溶胶

实验报告

摘要

将一抗（单链抗体）标记到 胶体金 ，将抗原固定到试纸条上，通过竞争法定性检测待测标本中的抗原。要求：检测灵敏度达到5μg/mL。

1 试剂和耗材

名称公司名称公司名称公司

A α2b注射液20μg/mL、金标抗体：单链抗体、质控线包被蛋白：标签抗体、检测线蛋白：抗原客户提供吸水纸、底板、玻纤（金标释放垫）、玻纤（样品层析垫）、硝酸纤维素膜Millipore胶体金溶液、封闭液、金复溶液南京钟鼎生物

2 主要实验仪器材料

仪器名称公司仪器名称公司

离心机：Mini-14k型杭州奥盛仪器有限公司喷点系统（划膜仪）：HM3030型、斩切机：ZQ2002 型上海金标

3 实验步骤

3.1 标记

取1支1.5mL离心管用超纯水清洗两遍，吸取1mL胶体金加入管中，向管中加入14μL0.2M碳酸钾后震荡离心管使其混合均匀，加入8μg单链抗体，混匀后反应20min。加入200μL10%BSA封闭反应20min。在11000r/min 转速下离心20min。弃去上清，用2mL 金复溶夜将沉淀复溶后铺在6mm×300mm的金垫上干燥。

3.2 点膜

将客户提供的抗原稀释至2mg/mL，用点膜仪喷点在NC膜上作为检测线，将客户提供的标签抗体稀释至0.6mg/mL，喷点在NC膜上作为质控线，55℃烘干箱干燥2h。

3.3 组装检测

在底板上从上到下依次粘贴吸水纸、NC膜、金垫（两层）、样品层析垫，用斩切机切成4mm宽的试纸条装入卡壳中用以检测。

3.4 金标抗体的验证及灵敏度测试

检测方法是用样品稀释液将A α2b注射液按照1:1的比例稀释，然后取稀释后的样品60μL滴于试纸条加样孔上，10min后判读结果。

图1 A α 2b不同浓度以及阴性对照结果

1：样品稀释液

2：0.5 μg/mL A α2b

3：2.5 μg/mL A α2b

图1左1试纸条CT线都比较明显，2号T线位置未完全抑制，3号基本完全抑制，试纸条检测重组人干扰素α 2b的灵敏度在5μg/mL左右。

3.5 加速稳定性实验

用以上方法制作的试纸条放入37℃环境下3天和7天后，再拿出来检测，结果如图2和图3。

图2 试纸条37℃3天检测结果

1：2.5 μg/mL A α 2b

2：0.5 μg/mL A α 2b

3：样品稀释液

图3 试纸条37℃7天检测结果

1：样品稀释液

2：0.5 μg/mL A α 2b

3：2.5 μg/mL A α 2b

图 2、3 中可以看出试纸条在 37℃下保存 7 天对检测性能没有太大影响。

4 结果讨论分析

经过以上实验，试纸条检测重组人干扰素α 2b注射液的灵敏度在5μg/mL左右，试纸条在4℃密封条件下能稳定保存 6个月左右。

南京钟鼎生物技术官网

去掉盐，也就是用

去离子水

多洗

，不过需要

高速离心机

，否则小粒子下不来。另外，用TEM测试的话，需要做多浓度的实验，可以用毛细管点不同浓度（相差可以10倍）的溶液观察一下，如果没有合适的，可以继续调节，直到粒子均匀分散在碳膜上。其次，用场发射SEM也可以看，但同样要洗，不过可以不用TEM滴样那么麻烦，可以滴加一滴，倾斜样品台，让

液滴

流动，这样就能形成一定的浓度梯度，看起来选择合适区域拍照即可。

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