叙述细菌,放线菌,酵母菌,霉菌的光学显微镜制片方法

一、细菌制片及简单染色：

1、涂片

取洁净的载玻片1张，将其在火焰上微微加热，除去上面的油脂，冷却，在中央部位滴加一滴无菌水，用接种环在火焰旁从培养基上挑取少量菌体与水混合。用接种环将菌体涂成直径约1cm的均匀薄层。注意，取菌量不宜过大，一面造成军体重叠。

2、干燥

放在桌面上，待其自然干燥。

3、固定

将已干燥的涂片标本向上，在火焰上通过3-4次固定。其目的是杀死细菌；使菌体蛋白质凝固，菌体牢固粘附于载玻片上，染色时不被染液或水冲掉；增加菌体对染料的结合力，使图片易着色。

4、染色

在涂片上滴加染料1-2滴，使其布满涂菌部分，染色1分钟。

5、冲洗

斜置玻片，倾去染液。用水轻轻冲去染液，至流水变清。注意水流不能直接冲洗涂菌处，以免将涂菌冲洗掉。

6、吸干

用吸水纸轻轻吸去玻片上的水分，干燥后镜检。

二、酵母菌制片及简单染色。

水—碘液浸片法。将革兰氏染色用碘液用水稀释4倍后，滴加一滴于载破片中央，无菌操

作取少许菌体置于染色中混匀，盖上破片后镜剑。

三、放线菌制片方法（插片法）

1、在马铃薯浸汁琼脂培养基平板上，划线接入少量放线菌的孢子，在接种线旁倾斜地插入无菌盖玻片，于28-30℃培养。

2、培养3～4天后，菌丝沿着盖玻片向上生长，待菌丝长好后，取出盖玻片放在干净的载玻片上，置于显微镜下观察。

四、霉菌制片法

水浸制片法：

1、在载玻片上滴加一滴乳酸石炭酸棉蓝染色液或蒸馏水。

2、用解剖针从生长有霉菌的斜面挑取少量带有孢子的霉菌菌丝，用50%的乙醇浸润，再用蒸馏水将浸过的菌丝洗一下，然后放入载玻片上的液滴中，仔细地用解剖针将菌丝分散开来。（也可省略酒精和水浸润，洗涤）

3、注意取菌时，毛霉和根霉用解剖针挑取少量菌丝即可，青霉和黑曲霉和培养基结合紧密，不易挑取，可连培养基一起挑取，再在染液中分离菌丝。青霉和曲霉的培养时间不宜过长，一般为2-2.5天，以免菌丝与培养基不好剥离。

4、盖上盖玻片（勿使产生气泡，且不要再移动盖玻片）。（黑曲霉不易观察到足细胞）

5、镜检：先用低倍镜，必要时转换高倍镜镜检并记录观察结果。

扫描电镜成像原理主要有两种，二次电子像(secondary electron)：形貌衬度，就是你的细菌外表有凸凹形貌，可以拍摄形貌像；背散射电子探头(back scatter electron)：原子序数衬度，你可以进行染色，把一些重金属的盐类设法溶进细菌体内，然后用BSE观察时，细菌就是白亮的。

具体不懂的可以联系我，希望对你有帮助。

1.sem扫描电镜的原理是依据电子和物质的相互作用，扫描电镜从原理上讲就是利用聚焦得非常细的高能电子束在试样上扫描，激发出各种物理信息。

2.通过对这些信息的接收、放大和显示成像，获得测试试样表面形貌的观察。

3.sem是一种电子显微镜，中文名为扫描电子显微镜，通过用聚焦电子束扫描样品的表面而产生样品表面的图像。

4.它由电子光学系统、信号收集及显示系统、真空系统和电源系统组成，应用于生物、医学、材料和化学等领域。

5.扫描电镜（SEM）是介于透射电镜和光学显微镜之间的一种微观形貌观察手段，可直接利用样品表面材料的物质性能进行微观成像。

6.扫描电镜的优点是，有较高的放大倍数，20-20万倍之间连续可调。

7.有很大的景深，视野大，成像富有立体感，可直接观察各种试样凹凸不平表面的细微结构。

8.试样制备简单。

9.目前的扫描电镜都配有X射线能谱仪装置，这样可以同时进行显微组织形貌的观察和微区成分分析，因此它是当今十分有用的科学研究仪器。

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