如何配制mes缓冲液

配制方法：计算MES用量至终浓度 30mmol/L；称重，用 Tris碱溶液（饱和或不饱和，其浓度都没关系）调节pH至6.5；加水定量就可以了。

在化学上用，化学物品和溶剂（一般是水）配制成实验需要浓度的溶液的过程就叫做配制溶液。配制溶液前需要计算所需物品的多少并清理仪器。

配制溶液注意事项：

1、氢氧化钠为碱性化学物质，浓盐酸为酸性化学物质，注意不要溅到手上、身上、以免腐蚀,实验时最好戴上防护眼镜。一旦不慎将氢氧化钠溅到手上和身上，要用较多的水冲洗，再涂上硼酸溶液。称量时，使用烧杯放置。

2、要注意计算的准确性。

3、注意移液管的使用。

4、稀释浓硫酸是把酸沿器壁慢慢注入水中，用玻璃棒不断搅拌。

5、配好的溶液要及时装入试剂瓶中，盖好瓶塞并贴上标签（标签中应包括药品名称和溶液中溶质的质量分数（或摩尔分数）），放到相应的试剂柜中。

10mmol/L HEPES缓冲液配制方法如下：

准确称取HEPES 2.383g，加入新鲜三蒸水定容至1L。过滤除菌，分装后4℃保存（用于加入细胞培养液中作缓冲剂时，培养液需要避光保存）。

Hepes缓冲液的用途：对细胞无毒性作用。是一种氢离子缓冲剂，能较长时间控制恒定的pH范围。使用终浓度为10-50mmol/L，培养液内含20mmol/LHEPES即可达到缓冲能力。

扩展资料

HEPES buffer缓冲溶液的配制方法：

一、500ml 1 M HEPES, pH = 7.0 Stock solution的配制

119.15 g HEPES 溶解在400ml蒸馏水中，加0.5~1M 的NaOH水溶液调节至所需pH，然后用蒸馏水定容至500ml，于4摄氏度保存。

二、加少量盐的HEPES Buffer配方（500ml）

HEPES 6.5g、NaCl 8.0g、Na2HPO4.7H2O 0.198g、用0.5M NaOH 水溶液调节pH值，最后定容。

注：HEPES的有效pH范围是6.8~8.2。

参考资料来源：百度百科-HEPES

第一向等电聚焦 ⒈ 从冰箱中取-20℃冷冻保存的水化上样缓冲液（I）（不含DTT，不含IPG buffer）一小管（1ml/管），置室温溶解。 ⒉ 在小管中加入0.01g DTT， 0.5% 对应胶条pH范围的IPG buffer，充分混匀。 ⒊ 从小管中取出400ml水化上样缓冲液，加入100ml样品（考马斯亮蓝染色需样品1mg，银染需300μg），充分混匀。 ⒋ 从冰箱中取-20℃冷冻保存的IPG预制胶条，室温中放置10分钟。 ⒌ 沿着聚焦盘或水化盘中槽的边缘至左而右线性加入样品。在槽两端各1cm左右不要加样，中间的样品液一定要连贯。注意：不要产生气泡。否则影响到胶条中蛋白质的分布。 ⒍ 当所有的蛋白质样品都已经加入到聚焦盘或水化盘中后，用镊子轻轻的去除预制IPG胶条上的保护层。 ⒎ 分清胶条的正负极，轻轻地将IPG胶条胶面朝下置于聚焦盘或水化盘中样品溶液上，使得胶条的正极（标有+）对应于聚焦盘的正极。确保胶条与电极紧密接触。不要使样品溶液弄到胶条背面的塑料支撑膜上，因为这些溶液不会被胶条吸收。同样还要注意不使胶条下面的溶液产生气泡。如果已经产生气泡，用镊子轻轻地提起胶条的一端，上下移动胶条，直到气泡被赶到胶条以外。 ⒏ 在每根胶条上覆盖1-3ml矿物油，防止胶条水化过程中液体的蒸发。需缓慢的加入矿物油，沿着胶条，使矿物油一滴一滴慢慢加在塑料支撑膜上。 ⒐ 对好正、负极，盖上盖子。设置等电聚焦程序。 ⒑聚焦结束的胶条。立即进行平衡、第二向SDS-PAGE电泳，否则将胶条置于样品水化盘中，-20℃冰箱保存。第二向SDS-PAGE电泳 ⒈ 装配灌胶模具，配制10%的丙烯酰胺凝胶两块。配200ml凝胶溶液，每块凝胶50ml，将溶液沿灌胶模具背面槽道倒入，直至溶液到距离玻璃板1cm停止，用75%乙醇或水饱和正丁醇封面，保持胶面平整。聚合30分钟后，凝胶与上方液体分层，表明凝胶已基本聚合，建议聚合3-5h使凝胶完全聚合。 ⒉ 待凝胶凝固后，倒去分离胶表面的MilliQ水、乙醇或水饱和正丁醇，用MilliQ水冲洗。 ⒊ 从-20℃冰箱中取出的胶条，先于室温放置10分钟，使其恢复至室温。 ⒋ 配制胶条平衡缓冲液I（含DTT）。 5．在桌上先放置干的厚滤纸，聚焦好的胶条胶面朝上放在干的厚滤纸上。将另一份厚滤纸用MilliQ水浸湿，挤去多余水分，然后直接置于胶条上，轻轻吸干胶条上的矿物油及多余样品。这可以减少凝胶染色时出现的纵条纹。 ⒍ 将胶条转移至平衡管或溶胀盘中，每个槽一根胶条，在有胶条的槽中加入5-10ml胶条平衡缓冲液I。将平衡管或溶胀盘放在水平摇床上缓慢摇晃15分钟。 ⒎ 配制胶条平衡缓冲液Ⅱ（含碘乙酰胺）。 ⒏ 第一次平衡结束后，彻底倒掉或吸掉样品水化盘中的胶条平衡缓冲液I。并用滤纸吸取多余的平衡液（将胶条竖在滤纸上，以免损失蛋白或损坏凝胶表面）。再加入胶条平衡缓冲液Ⅱ，继续在水平摇床上缓慢摇晃15分钟。 ⒐ 用滤纸吸去SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶上方玻璃板间多余的液体。将处理好的第二向凝胶放在桌面上，长玻璃板在下，短玻璃板朝上，凝胶的顶部对着自己。 ⒑将低熔点琼脂糖封胶液进行加热溶解。 ⒒将10×电泳缓冲液，用量筒稀释10倍，成1×电泳缓冲液。赶去缓冲液表面的气泡。 ⒓第二次平衡结束后，彻底倒掉或吸掉样品水化盘中的胶条平衡缓冲液Ⅱ。并用滤纸吸取多余的平衡液（将胶条竖在滤纸上，以免损失蛋白或损坏凝胶表面）。 ⒔将IPG胶条从样品水化盘中移出，用镊子夹住胶条的一端使胶面完全浸末在1×电泳缓冲液中。然后将胶条胶面朝上放在凝胶的长玻璃板上。其余胶条同样操作。 ⒕将放有胶条的SDS-PAGE凝胶转移到灌胶架上，短玻璃板一面对着自己。在凝胶的上方加入低熔点琼脂糖封胶液。 ⒖用镊子、压舌板或是平头的针头，轻轻地将胶条向下推，使之与聚丙烯酰胺凝胶胶面完全接触。注意不要在胶条下方产生任何气泡。在用镊子、压舌板或平头针头推胶条时，要注意是推动凝胶背面的支撑膜，不要碰到胶面。 ⒗放置5分钟，使低熔点琼脂糖封胶液彻底凝固。 ⒘在低熔点琼脂糖封胶液完全凝固后。将凝胶转移至电泳槽中。 ⒙在电泳槽加入电泳缓冲液后，接通电源，起始时用的低功率（1W/gel/18-24cm）或低电压，待样品在完全走出IPG胶条，浓缩成一条线后，再加大电流（或电压）（13-15W/gel/18-24cm），待溴酚蓝指示剂达到底部边缘时即可停止电泳。 ⒚电泳结束后，轻轻撬开两层玻璃，取出凝胶，并切角以作记号（戴手套，防止污染胶面）。 ⒛进行染色。

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