qpcr数据分析及作图方法

qPCR数据处理方法为△△Ct法原理

【△△Ct法原理】其特点是只依靠Ct值来计算结果，因此跑完qPCR之后的结果中除了Ct值外，其他数据几乎在后续分析和计算中是用不到的。但前提是目的基因和内参基因的扩增效率应基本一致。

1、先来了解一下什么是Ct值？

阈值循环数 Threshold cycle (Ct) 也写作Cq值，荧光信号达到荧光阈值时PCR循环数。仪器软件通常将第3-15个循环的荧光值设为基线（baseline）。阈值（threshold）一般是基线的标准偏差的10倍。模板的Ct值与该模板的起始拷贝数的对数存在一定线性关系,起始模板量浓度越高，Ct值越小；起始模板量浓度越低，Ct值越大。PCR循环在到达Ct值所在的循环数时，刚刚进入真正的指数扩增期（对数期），此时微小误差尚未放大，Ct值的重现性较好，即相同含量的初始模板，得到的Ct值是相对稳定的。

1、整理qPCR数据如下。Sample为模板名称，595为引物扩增的基因名称，actin为内参。

2、计算ΔCt。ΔCt=基因值-内参值。

3、计算均值。以野生型SY4D表达量为1，只需计算SY4D均值。

4、计算ΔΔCt。ΔΔCt=ΔCt-average。注意average是同一个，函数上加$。

5、计算2^(-ΔΔCt)。

6、计算2^(-ΔΔCt)均值。三个重复计算平均值即可，用于作图。

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