防脱片的制备

一、载玻片和盖玻片的处理

将载玻片或培养用的小盖片浸泡在重铬酸钾浓硫酸清洁液中24小时，然后流水充分冲洗，再用蒸馏水冲洗3遍以上，而后置95%乙醇中12小时。取出擦干或烤干，贮放于玻片盒内备用。盖玻片很薄，以上处理程序必须缩短时间，清洁液浸泡只需2小时，流水冲洗注意勿损伤玻片。

二、黏附剂的使用

1．多聚左旋赖氨酸(poly-1—lysine)

首先配制0．1%(ω/υ)多聚左旋赖氨酸浓缩液，室温下(18～26℃)可保存1年。使用时，将试剂10倍稀释成工作液，浓度为0．01%(ω/υ)，2—8℃冰箱保存，有效期3个月。使用方法是将充分洗净和预先干燥的玻片浸泡于稀释后的多聚左旋赖氨酸溶液数十秒或提拉十次，沥干．于室温下晾干12—24小时或在45℃以下烤箱内烘干。处理后的玻片避光干燥可保存三个月。

2．APES(3—氨丙基—乙氧基甲硅烷)

APES必须现用现配。用此方法黏合的玻片应垂直烤片而不能水平烤片，否则，组织片中易出现气泡。APES的使用方法：用丙酮50倍稀释(APESl份、丙酮49份混合)，将洗净的玻片放人稀释好的APES中，停留20～30秒，取出稍停，再人纯丙酮或蒸馏水中涮去未结合的APES。置通风橱中晾干即可。注意用APES防脱片处理的载玻片捞片时组织应一步到位．并尽量减少气泡存在，以免影响染色结果。注意不要将APES与其他防脱片剂混合使用。

1) 按材料分：浮法玻璃与石英玻璃

2) 货号分：7101 磨砂边

7102 毛边

7103 单凹

7104 双凹

7105 单头单面磨砂 磨砂边

7105-1 单头单面磨砂 毛边

7106 双面单面磨砂 磨砂边

7107 单头双面磨砂 磨砂边

7107-1 双面单面磨砂 毛边

7108 双面双头磨砂

7109 彩色蒙砂

7110 单面正面磨砂

7111 双面整面磨砂

3）按是否免洗：免洗载玻片和未免洗载玻片

4）按磨砂角度分：45°C磨边载玻片、90°直角彩色载玻片与八面倒角载玻片

5）按防脱种类分：多聚赖氨酸载玻片、硅化防脱载玻片与正电荷防脱载玻片

6）按包装规格分：50片装与72装

7）按抛光分：抛光边载玻片与未抛光载玻片

8）按能否做记号分记号载玻片和普通载玻片

其中记号载玻片：新型公开了一种记号载玻片，属于显微检测器材技术领域，载玻片的一端设有一层压感纸，压感纸上设有一层塑料覆膜。本实用新型构造简单，使用方便，可直接用笔将标本编号记在塑料覆膜上，压感纸上就会现显带有颜色的号码。其编号在检测过程中不会因涂抹或浸泡造成编号不清晰，不需另外用标签纸再书写编号贴在载玻片上，使操作更加简便。

9）载玻片的组合数量分：单个载玻片和复合载玻片

其中复合载玻片：本发明公开了一种复合载玻片的加工工艺，包括如下步骤：①取一块平玻片，在其上加工一个或一个以上的空心洞，且将表面进行镀膜；②将另一块平玻片加工成厚薄一致的平面玻片；③采用热压或光学胶合的方式将上述两块平玻片复合在一起，即得复合载玻片。本发明的加工工艺具有加工简单、准确、成品率高等优点。

10）按用途分：显微载玻片和细胞培养载玻片

11）按厚度分：有1mm,2mm,3mm等，最厚可以到8㎜

甲苯胺蓝染色液染色方法

甲苯胺蓝 是常用的人工合成染料的一种属于醌亚胺染料类，是碱性染料， 甲苯胺蓝 中的阳离子有染色作用，组织细胞的酸性物质与其中的阳离子相结合而被染色，可染细胞核使之呈蓝色；肥大细胞胞质内含有肝素和组织胺等异色性物质遇到甲苯胺蓝可呈异染性紫红色，可用于尖锐湿疣的初筛及肥大细胞的检测。不推荐用于软骨、胃粘膜等难染组织的染色。

肥大细胞的染色:

（1）组织脱蜡至水。

（2）蒸馏水浸洗2-3次。

（3） 甲苯胺蓝染液 染20-30min。

（4）稍水洗，洗去多余染色液。

（5）95%酒精分色，在镜下控制分色效果。

（6) 用100%酒精脱水。

（7） 二甲苯 透明， 中性树胶 封片。

肥大细胞染色结果：肥大细胞颗粒呈红紫色，胞核呈蓝色。

细胞涂片染色 ：

（1）细胞涂片后，立即放入95%的乙醇中固定，取出放在纸巾上。

（2）滴加1～2滴稀释后的甲苯胺蓝染色液进行滴染，加盖玻片让染料渗透到细胞中。

（3）后将玻片竖起，稍加压力，使多余染料被纸巾吸去。

（4）无需干燥，直接镜检。

细胞涂片染色结果：细胞核、淋巴细胞呈深蓝色；核仁呈紫红色；红细胞呈橘红；细胞质、单核细胞呈淡蓝色。

原位杂交染色 ：

（1）用蒸馏水或去离子水稀释到相应的浓度，凭经验一般稀释比例大于1:10。

（2） 玻片在稀释好的染色液中短暂浸泡。

（3） 在蒸馏水或去离子水浸泡数次。

（4） 按需求进行压片固定。

神经元细胞的染色：

（1）将载有细胞的玻片取出放入4％多聚甲醛中固定1h左右；

（2）到时间后取出用PBS冲洗1～2次即可；

（3）然后加入提前预热的1％甲苯胺蓝溶液，在50度左右的气浴或水浴中染色20～30min；

（4）用梯度酒精已次脱水，分别为75％、90％、100％，也可自定梯度；

（5）在镜下控制分色效果，这一步不太好掌握；

神经元细胞染色结果：可见尼氏小体深蓝色颗粒，细胞核呈淡蓝色，背景基本无色。

北京索莱宝科技有限公司 自产产品 1%甲苯胺蓝染色液 ，货号为 G1220 ，主要用于生化实验中肥大细胞的检测。

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