观察细胞表面立体结构的技术

使用扫描电镜SEM，是细胞形态学研究的主要手段。

体视显微镜也可以观测，但放大倍数太低，有效放大几十倍吧，看到细胞应该没有问题，可能影像跟针尖似的，无法看清楚细胞的表面结构，

当前还可以采用激光共聚焦显微镜来观测，分辨率可以达到160nm，有效放大倍数2000倍。通过样品台按照一定步距的升降，每一个步距扫描生成一幅图像。然后把一系列高度的图像在计算机中拟合生成三维形貌。

1、放大率：

与普通光学显微镜不同，在SEM中，是通过控制扫描区域的大小来控制放大率的。如果需要更高的放大率，只需要扫描更小的一块面积就可以了。放大率由屏幕/照片面积除以扫描面积得到。

所以，SEM中，透镜与放大率无关。

2、场深：

在SEM中，位于焦平面上下的一小层区域内的样品点都可以得到良好的会焦而成象。这一小层的厚度称为场深，通常为几纳米厚，所以，SEM可以用于纳米级样品的三维成像。

3、作用体积：

电子束不仅仅与样品表层原子发生作用，它实际上与一定厚度范围内的样品原子发生作用，所以存在一个作用“体积”。

4、工作距离：

工作距离指从物镜到样品最高点的垂直距离。

如果增加工作距离，可以在其他条件不变的情况下获得更大的场深。如果减少工作距离，则可以在其他条件不变的情况下获得更高的分辨率。通常使用的工作距离在5毫米到10毫米之间。

5、成象：

次级电子和背散射电子可以用于成象，但后者不如前者，所以通常使用次级电子。

6、表面分析：

欧革电子、特征X射线、背散射电子的产生过程均与样品原子性质有关，所以可以用于成分分析。但由于电子束只能穿透样品表面很浅的一层（参见作用体积），所以只能用于表面分析。

表面分析以特征X射线分析最常用，所用到的探测器有两种：能谱分析仪与波谱分析仪。前者速度快但精度不高，后者非常精确，可以检测到“痕迹元素”的存在但耗时太长。

观察方法：

如果图像是规则的（具螺旋对称的活体高分子物质或结晶），则将电镜像放在光衍射计上可容易地观察图像的平行周期性。

尤其用光过滤法，即只留衍射像上有周期性的衍射斑，将其他部分遮蔽使重新衍射，则会得到背景干扰少的鲜明图像。

扩展资料：

SEM扫描电镜图的分析方法：

从干扰严重的电镜照片中找出真实图像的方法。在电镜照片中，有时因为背景干扰严重，只用肉眼观察不能判断出目的物的图像。

图像与其衍射像之间存在着数学的傅立叶变换关系，所以将电镜像用光度计扫描，使各点的浓淡数值化，将之进行傅立叶变换，便可求出衍射像〔衍射斑的强度（振幅的2乘）和其相位〕。

将其相位与从电子衍射或X射线衍射强度所得的振幅组合起来进行傅立叶变换，则会得到更鲜明的图像。此法对属于活体膜之一的紫膜等一些由二维结晶所成的材料特别适用。

扫描电镜从原理上讲就是利用聚焦得非常细的高能电子束在试样上扫描，激发出各种物理信息。通过对这些信息的接受、放大和显示成像，获得测试试样表面形貌的观察。

参考资料：百度百科-扫描电子显微镜

操作：

一、要观察细胞，我们首先要制作装片。

临时装片制作

1． 在载玻片的中央滴一滴清水，用镊子将材料放入其中，加盖盖玻片后用吸水纸将周围的水吸净擦干净后放到载物台上观察。

2． 如果有气泡，可以用滴管在盖玻片一侧滴加清水，用吸水纸在另一侧吸引排出气泡。

3． 载物台一定要保持水平，避免清水流出污染载物台。

二、观察装片

操作方法

1． 调节亮度：由暗调亮，可以用大光圈，凹面镜，调节反光镜的角度。

2． 将临时装片在载物台上适当位置固定好。

3．低倍物镜对准通光孔，使用粗准焦螺旋将镜筒自上而下的调节，眼睛在侧面观察，避免物镜镜头接触到玻片而损坏镜头和压破玻片。

4． 左眼通过目镜观察视野的变化，同时调节粗准焦螺旋，使镜筒缓慢上移，直至视野清晰为止。

5． 如果在视野中没有被观察对象，可以移动装片，原则为欲上反下，欲左反右。

6． 如果不够清晰，可以用细准焦螺旋进一步调节。

7． 如果需要在高倍物镜下观察，可以转动转换器调换物镜。如果视野较暗，可通过1的方法调节；如果不够清晰，可通过6的方法调节，但是不可以用4的方法。

8． 使用完毕后，请调节转换器，使空镜头孔对着通光孔，使反光镜竖起来，将镜筒调至最低后装入镜箱

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