那位大侠能解释一下相对定量和绝对定量PCR的区别

一、目的不同

1、相对定量：是测定目的基因在两个或多个样本中的含量的相对比例，而不需要知道它们在每个样本中的拷贝数。

2、绝对定量PCR：是一种在DNA扩增反应中，以荧光染剂侦测每次聚合酶链锁反应（PCR）循环后产物总量的方法技术

二、原理不同

1、相对定量：利用CT值与起始DNA浓度的对数成反比的数学关系，来计算不同样本之间的相对百分比。

2、绝对定量PCR：是利用荧光信号的变化，实时检测PCR扩增反应中每次循环扩增产物量的变化，通过循环阈值和标准曲线的分析对标本中起始模板拷贝数进行定量分析。

三、标准曲线不同

1、相对定量：可以做标准曲线，也可以不做标准曲线。

2、绝对定量PCR：实验必须使用已知拷贝数的绝对标准品，必须做标准曲线。

参考资料来源：百度百科-相对定量

参考资料来源：百度百科-定量PCR

怎样验证目的基因和内参基因的扩增效率一致

相对定量有两种方法.要求扩增效率相同的是ΔΔCt法,因为只有扩增效率相同目的基因与内参基因的Ct值之差才是恒定的值,这是使用这种方法处理数据的前提,所以正式实验之前要进行条件优化,这种方法的优势是不用作标准曲线.如果扩增效率不同就要用另一种双标准曲线法,这种方法需要标准品,稀释不同的浓度梯度,作标准曲线,根据标准曲线得到你的拷贝数在进行数据处理,得到相对值.

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