红细胞制备中应注意哪些问题

红细胞计数方法分为显微镜计数法和血液分析仪计数法两大类，其中显微镜计数法中的相关注意事项是检验专业事业单位招聘考试经常考察的知识点，青海中公卫生人才网的小编就本文总结了一些相关的知识点，以帮助大家复习备考。

现在红细胞计数的显微镜计数法常用改良的牛鲍计数板来进行计数，计数的原理是采用等渗稀释液将血标本稀释一定倍数，滴入血细胞计数室中，显微镜下计数一定区域内红细胞数，经换算得每升血液中红细胞数量。计数板中央大方格4角和中心的5个中方格为计数红细胞和血小板的区域。

在计数过程中需要注意的问题主要有以下几个方面：

1.稀释液的成分中还有氯化高汞，有毒，需做好防护。

2.所用血液标本可以是抗凝全血，也可以是指尖血，若是用指尖血，要注意采血时不能过度挤压，而且第一滴血应弃去。

3.注意准确取稀释液2ml，血液10μl，取样量不准也会导致后期计算出现误差。

4.将血液加入稀释液时要注意擦去管外余血，将微量吸管插入底部加入，同时用胶头吸取管中稀释液反复清洗2-3次。

5.充池时注意不要有气泡产生，否则会影响计数。若有气泡出现，应重新充池。

6.充池后应静置2-3分钟之后再进行镜下计数。

7.对于刚好压线的细胞，计数时应遵循数上线不数下线，数左线不数右线的原则，以减少误差。

血清和血浆均是不含细胞（包括血小板）等有形成分的血液液体部分，其主要区别是血清不含凝血因子和血小板，血浆则含有凝血因子，它们的制备方法如下：

1、血清的制备：获得的血液不能抗凝，盛于离心管或可以离心的器皿中，静置或置37℃环境中促其凝固，待血液凝固后，将其平衡后离心（一般为3000rpm，离心5～10min），得到的上清液即为血清，可小心将上清吸出（注意切勿吸出细胞成分），分装备用。

2、血浆制备：在盛血的容器中先加人一定比例的抗凝剂（抗凝剂：血液=1：9，将血液加到一定量后颠倒混匀，离心（离心条件同上）后所得的上清液即为血浆。初用者最好将上清移至另一清洁容器，吸出血浆时用毛细吸管贴着液面逐渐往下吸，切忌不能吸起细胞成分。

3、富含血小板血浆制备：将获得的血液经800rpm，离心5min，其上清即为富含血小板血浆。

扩展资料：

鉴别方法

1、血清

血液凝固析出的淡黄色透明液体。如将血液自血管内抽出，放入试管中，不加抗凝剂，则凝血反应被激活，血液迅速凝固，形成胶冻。凝血块收缩，其周围所析出之淡黄色透明液体即为血清，也可于凝血后经离心取得。在凝血过程中，纤维蛋白原转变成纤维蛋白块，所以血清中无纤维蛋白原，这一点是与血浆最大的区别。

而在凝血反应中，血小板释放出许多物质，各凝血因子也都发生了变化。这些成分都留在血清中并继续发生变化，如凝血酶原变成凝血酶，并随血清存放时间逐渐减少以至消失。这些也都是与血浆区别之处。但大量未参加凝血反应的物质则与血浆基本相同。为避免抗凝剂的干扰，血液中许多化学成分的分析，都以血清为样品。

2、血浆

血浆是血液的液体成分，血细胞悬浊于其中。人体含有2750-3300毫升血浆，约占血液总体积的55%。血浆的绝大部分是水（体积的90%），其中溶解的物质主要是血浆蛋白，还包括葡萄糖、无机盐离子、激素以及二氧化碳。血浆的主要功能是运载血细胞，同时也是运输分泌产物的主要媒介。

将新鲜血液离心，使血细胞沉降，上层淡黄色清液即是血浆。血浆与血清的区别是血清中不含纤维蛋白原等凝血因子。

参考资料来源：百度百科-血清

取样，戊二醛等固定液固定，酒精梯度脱水，冷冻干燥or二氧化碳临界点干燥，喷金或蒸碳。

以上四个步骤，根据所使用的SEM成像的真空模式，可以有所省略。

如果用ESEM，取样后可直接放入样品室，在一定“环境真空”下进行观察；如果采用LV模式，直到干燥，可以免喷金；高真空模式，必须做到喷金等样品导电处理。

具体可到公益网站：中山大学生物电子显微学实验室网站查询

扫描电镜样品制备: 基础课程，生物样品因含水，其样品制备有其特殊性。

http://bioem.sysu.edu.cn/wiki/index.php/%E9%A6%96%E9%A1%B5

有时候公益网站有点那个，不好点开，请看转载链接http://coxem2010.blog.163.com/blog/static/16510375720114192413945/

---