做藻类的试验，怎么测定水中的藻类含量。最好是包括试验装置图片的

一般用测定叶绿素a来表示藻类的含量：

实验14 叶绿素a和b含量的测定（分光光度法）

一、目的

学会Chla、b含量的测定方法，了解叶片中Chla、b的含量。

二、材料用具及仪器药品

菠菜叶片、721分光光度计、天平、研钵、剪刀、容量瓶（25ml）、漏斗、滤纸、乙醇（95%）

三、原理

叶绿素a、b在波长方面的最大吸收峰位于665nm和649nm，同时在该波长时叶绿素a、b的比吸收系数K为已知，我们即可以根据Lambert Beer定律，列出浓度C与光密度D之间的关系式：

D665=83.31Ca+18.60Cb…………………………….(1)

D649=24.54Ca+44.24 Cb…………………………….(2)

(1)(2)式中的D665、D649为叶绿素溶液在波长665nm和649nm时的光密度。

为叶绿素a、b的浓度、单位为每升克数。

82.04、9.27为叶绿素a、b在、在波长665nm时的比吸收系数。

16.75、45.6为叶绿素a、b在、在波长649nm时的比吸收系数。

解方程式(1)(2)，则得 ：

CA=13.7 D665—5.76 D649………………………(3)

CB=25.8 D649—7.6 D665……………………… (4)

G=CA+CB=6.10 D665+20.04 D649………(5)

此时，G为总叶绿素浓度，CA、CB为叶绿素a、b浓度，单位为每升毫克，利用上面（3）（4）（5）式，即可以计算叶绿素a、b及总叶绿素的总含量。

四、方法步骤

1．称取0.1克新鲜叶片，剪碎，放在研钵中，加入乙醇10ml共研磨成匀浆，再加5ml乙醇，过滤，最后将滤液用乙醇定容到25ml。

2．取一光径为1cm的比色杯，注入上述的叶绿素乙醇溶液，另加乙醇注入另一同样规格的比色杯中，作为对照，在721分光光度计下分别以665nm和649nm波长测出该色素液的光密度。

计算结果：

叶绿素a含量（mg/g. FW）=

叶绿素b含量（mg/g.FW）=

叶绿素总量（mg/g.FW）= 见链接

http://sky.scnu.edu.cn/jpkc/zwslx/fenye/jakj/li/shi-yan/14.htm

还有

实验33 叶绿素a和b含量的测定（分光光度法）

原理

如果混合液中的两个组分，它们的光谱吸收峰虽有明显的差异，但吸收曲线彼此又有些重叠，在这种情况下要分别测定两个组分，可根据Lambert—Beer定律，通过代数方法，计算一种组分由于另一种组分存在时对吸光度的影响，最后分别得到两种组分的含量。

如图9叶绿素a和b的吸收光谱曲线，叶绿素a的最大吸收峰在663nm，叶绿素b在645nm，吸收曲线彼此又有重叠。

根据Lambert—Beer定律，最大吸收光谱峰不同的两个组分的混合液，它们的浓度C与吸光度A之间有如下的关系（参阅实验86）：

A1=Ca·ka1+Cb·kb1 (1)

A2=Ca·ka2+Cb·kb2 (2)

式中：Ca为组分a的浓度，g/L。

Cb为组分b的浓度，g/L。

A1为在波长λ1（即组分a的最大吸收峰波长）时，混合液的吸光度A值。

A2为在波长λ2（即组分b的最大吸收峰波长）时，混合液的吸光度A值。

ka1为组分a的比吸收系数，即组分a当浓度为1g/L时，于波长

λ1时的吸光度A值。

kb2为组分b的比吸收系数，即组分b当浓度为1g/L时，于波长λ2时的吸光度A值。

ka2为组分a（浓度为1g/L）在波长λ2时的吸光度A值。

kb1为组分b（浓度为1g/L）在波长λ1时的吸光度A值。

从文献中可以查得叶绿素a和b的80%丙酮溶液，当浓度为1g/L时，比吸收系数k值如下：

将表中数值代入上式(1)、(2)，则得：

A663=82.04×Ca+9.27×Cb

A645=16.75×Ca+45.60×Cb

经过整理之后，即得到下式：

Ca=0.012 7 A663—0.002 69 A645

Cb=0.022 9 A645—0.004 68 A663

如果把Ca，Cb的浓度单位从原来的g/L改为mg/L，则上式可改写为下列形式：

Ca=12.7A663—2.69A645 (3)

Cb=22.9A645—4.68A663 (4)

Ct=Ca+Cb=8.02A663+20.21A645 (5)

(5)式中Ct为总叶绿素浓度，单位为mg/L。

利用上面(3)、(4)、(5)式，即可计算出叶绿素a和b及总叶绿素的浓度。

注：一般大学教学实验室所用的分光光度计多为721型，属低级类型，其单色光的半波宽值要比中级类型的751型大得多，而叶绿素a和b吸收峰的波长相差仅18nm（663—645nm），难以达到精确测定。此外有时还由于仪器本身的标称波长与实际波长不符，测定的正确性就更差了。根据公式计算往往会得到叶绿素a∶b值小于1，这就不很奇怪了。除向学生说明其中原因外，还可以在实验前对仪器的波长进行校正，使标称波长与实际波长一致。校正可用纯的叶绿素a和b进行，分别在波长650—670nm和630梍650nm之间，每隔1—2nm测定叶绿素a或b的吸光度A，以确定叶绿素a和b的吸收峰的波长。如果测得的峰值与文献上的峰值663nm和645nm不同，可按照仪器说明书步骤进行校正，或者更方便的方法可以打开仪器盖子，松动波长刻度盘紧固螺丝，调节刻度盘使波长至正确值，而后旋紧螺丝复原仪器。

为校正仪器波长所需的叶绿素a和b的用量是很少的，用纸层析法很快就能分离制得。取植物叶子约1g，用乙醚提取叶绿体色素，再用毛细管将色素溶液画在3mm厚滤纸上使成一直线，为使分离效果好，一般重复点样一次即可。然后于密闭容器中进行上行层析，溶剂为含0.5%丙醇的石油醚。层析结束，用剪刀小心地剪下蓝绿色的叶绿素a和黄绿色的叶绿素b，注意剪时尽量避开有可能遭污染的色区。最后分别浸于80%丙酮中，洗下叶绿素a和b

http://bio.biox.cn/Biology/200701/20070106230337_25343.shtml

只是说测叶绿素a是常规的表示藻类总量的方法，也有些在线直接测藻类的仪器，你可以搜一下。

如果你的不锈钢可以用手掰弯的话。你可以试试对样品掰弯处理，因为氧化铝模板是脆性的，所以在掰弯的时候肯定有地方裂开，裂开往上翘的角度大的在平面SEM中就可以侧向看到断面，我用过这个方法，还算是比较有效的方法

1、绿藻的细胞都是真核细胞，在光学显微镜下一般可以看到内部的色素体。比如水绵的螺旋形带状色素体，衣藻的杯状色素体等。如果有条件的话用电子显微镜可以看到细胞内有细胞核、叶绿体等。蓝藻的细胞是原核细胞，内部原生质均匀分布于细胞膜内，偶见颗粒，但都比较均匀，制成装片后在电子显微镜下看不到细胞核和叶绿体等结构。

2、绿藻细胞中的色素主要是叶绿素，细胞呈绿色，是一种偏黄的绿颜色；蓝藻细胞中叶绿素较少，藻蓝素较多，细胞呈现的是蓝绿色，蓝藻也叫 blue-green algae 。 这一点其实就够区分蓝藻和绿藻了，都是长期实践的总结啊。但要多看会看，区别很细微噢。

3.蓝藻本质上是单细胞藻类，一般有单细胞，丝状和聚集成群体的类型，绿藻有的单细胞的，也有多细胞的群体。

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