要对细菌做SEM，前处理是什么？需要把细菌弄成干态或者固定是吗？求详细的步骤

取样，戊二醛等固定液固定，酒精梯度脱水，冷冻干燥or二氧化碳临界点干燥，喷金或蒸碳。

以上四个步骤，根据所使用的SEM成像的真空模式，可以有所省略。

如果用ESEM，取样后可直接放入样品室，在一定“环境真空”下进行观察；如果采用LV模式，直到干燥，可以免喷金；高真空模式，必须做到喷金等样品导电处理。

具体可到公益网站：中山大学生物电子显微学实验室网站查询

扫描电镜样品制备: 基础课程，生物样品因含水，其样品制备有其特殊性。

http://bioem.sysu.edu.cn/wiki/index.php/%E9%A6%96%E9%A1%B5

有时候公益网站有点那个，不好点开，请看转载链接http://coxem2010.blog.163.com/blog/static/16510375720114192413945/

做电镜固定，25%戊二醛怎么稀释到2.5

透射电镜物品制备步骤

物品, 透射电镜, 制备步骤

．取材：

组织块于1立毫米

二．固定：

2.5%戊二醛磷酸缓冲液配制固定2或更间

用0.1M磷酸漂洗液漂洗 15 三

1%锇酸固定液固定2-3

用0.1M磷酸漂洗液漂洗 15 三

三．脱水：

50%乙醇15-20

70%乙醇15-20

90%乙醇15-20

90%乙醇 90%丙酮（1：1）15-20

90%丙酮15-20

4度冰箱内进行

100%丙酮 室温 15-20三

四．包埋：

纯丙酮+包埋液（2：1）室温 3-4

纯丙酮+包埋液（1：2）室温 夜

纯包埋液 37度 2-3

五．固化：

37度烘箱内 夜

45度烘箱内 12

60度烘箱内 24

六．超薄切片机切片 50-60 nm

七．3%醋酸铀-枸橼酸铅双染色

八．透射电镜观察拍片

由于物品含水太电镜真空蒸发掉破坏结构所需要些能够水温取代掉、并且自身没结构物质树脂包埋剂物脆弱、结构容易破坏所才需要温制才复杂物电镜制主要工作看电镜倒要物品超薄切片流程图：

无需，

处于饱和压力下的样品不会因为失水变形，因此无需任何物理化学固定！

如果是自己的电镜可以做，

但使用人家的东西，人家不一定给你用这个模式，所以最好老老实实按照步骤，来。

无非是制样需要耽误一两天时间！

---