要对细菌做SEM,前处理是什么?需要把细菌弄成干态或者固定是吗?求详细的步骤

要对细菌做SEM,前处理是什么?需要把细菌弄成干态或者固定是吗?求详细的步骤,第1张

取样,戊二醛等固定液固定,酒精梯度脱水,冷冻干燥or二氧化碳临界点干燥,喷金或蒸碳。

以上四个步骤,根据所使用的SEM成像的真空模式,可以有所省略。

如果用ESEM,取样后可直接放入样品室,在一定“环境真空”下进行观察;如果采用LV模式,直到干燥,可以免喷金;高真空模式,必须做到喷金等样品导电处理。

具体可到公益网站:中山大学生物电子显微学实验室网站查询

扫描电镜样品制备: 基础课程,生物样品因含水,其样品制备有其特殊性。

http://bioem.sysu.edu.cn/wiki/index.php/%E9%A6%96%E9%A1%B5

有时候公益网站有点那个,不好点开,请看转载链接http://coxem2010.blog.163.com/blog/static/16510375720114192413945/

扫描电镜成像原理主要有两种,二次电子像(secondary electron):形貌衬度,就是你的细菌外表有凸凹形貌,可以拍摄形貌像;背散射电子探头(back scatter electron):原子序数衬度,你可以进行染色,把一些重金属的盐类设法溶进细菌体内,然后用BSE观察时,细菌就是白亮的。

具体不懂的可以联系我,希望对你有帮助。

一、用脏手上的细菌制装片:

1、收集手上细菌,用少量无菌水(可用冷开水代替)冲洗脏手,让洗手的水流到培养皿中。这些脏水就是细菌培养液。

2、制取细菌装片,取甲、乙两块洁净的载玻片,分别在两玻片的中央各滴一小滴细菌培养液;然后在甲片上盖好盖玻片后直接用600倍的显微镜观察。

(用稍偏暗的视野,调节到位可以看到多种细菌和其它微生物。很容易看到活动的微生物,这样对儿童更有吸引力和教育意义。)如果你想进一步放大并会操作,选定观察的物象后,可把此物象移到视野正中央,再转换更高倍数的镜头观察即可。

3、在乙片的细菌培养液滴上滴一小滴龙胆紫染色液,用牙签将细菌培养液和龙胆紫液搅匀、并将液滴推开,再用酒精灯加热液滴(约5秒钟)后让它自然晾干(约5分钟)。

再用600倍的显微镜直接观察,既可以看到染成深蓝色的多种细菌和其它微生物。不过此时看到的微生物都已死亡、并被固定,因此看不到它们的活动状态。

二、制取洗手后的对照装片。

1、洗手-----将手用香皂洗干净,用洁净的干毛巾揩干手;

2、收集细菌培养液-------用少量无菌水冲洗双手,让洗手液流入洁净的培养皿中;

3、制细菌装片-----制片过程与以上装片过程相同,参照制片即可。

扩展资料:

细菌的基本形态与大小

(1)球菌

球菌是外形呈圆球形或椭圆形的细菌,直径0.5~1微米,有以下几种类型:

①单球菌:单独存在,如尿素小球菌;②双球菌:如肺炎双球菌;

③链球菌:如乳酸链球菌;④四联球菌:形成的4个细胞排列在一起,成田字,如四联球菌;

⑤八叠球菌:如尿素生孢八叠球菌;⑥葡萄球菌:如金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)。

(2)杆菌

外形为杆状的细菌称杆菌,常有长宽接近的短杆或球杆状菌,如甲烷短杆菌属(Methano—brevibacter);

长宽相差较大的棒杆状或长杆状菌,如枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)、梭状杆菌(Bacteriumfusiformis);

分枝状或叉状菌,如双歧杆菌属(Bifidobacterium);竹节状(两端平截),如炭疽芽孢杆菌(Bacillusanthracis)等。

按杆菌细胞的排列方式不同则有成对的双杆菌、呈链状的链杆菌,另外,常有栅状、“八”字状以及由鞘衣包裹在一起的丝状等多种。典型的杆菌有大肠杆菌、枯草杆菌、链杆菌、变形杆菌[2]。

(3)螺旋状:

螺旋状的细菌称螺旋菌,一般长5~50微米,宽0.5~5微米,根据菌体的弯曲可分为:

①弧菌(Vibrio):螺旋不足一环者呈香蕉状或逗点状,如霍乱弧菌(Vibriocholerae);②螺菌(Spirillum):满2~6环的小型、坚硬的螺旋状细菌,如小螺菌(Spirillumminor);

③螺旋体(Spirochaeta):旋转周数多(通常超过6环)、体长而柔软的螺旋状细菌,如梅毒螺旋体(TreponemaPallidum)。

参考资料来源:百度百科-细菌


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