SEM为什么不能观察生物样品

扫描电镜可以观察生物样品！当前SEM在生物组织形态结构方面研究普遍应用。

你向问的问题似乎是：SEM为什么不能观察活的生物样品？

传统扫描电镜工作模式需要将样品处于高真空环境下，因此对样品的基本要求是干燥、无油、导电。

这种条件下，无法满足活生物样观察！但活的生物样品在一定时空下的形态，通过生物组织固定，脱水，干燥，喷金即可观察，可以了解在有生命状态下的组织结构特征。

为了实现活的生物样品观察，美国公司开发的环境扫描电镜已经商品化！

扫描电子显微镜（SEM）是1965年发明的较现代的细胞生物学研究工具，主要是利用二次电子信号成像来观察样品的表面形态，即用极狭窄的电子束去扫描样品，通过电子束与样品的相互作用产生各种效应，其中主要是样品的二次电子发射。

二次电子能够产生样品表面放大的形貌像，这个像是在样品被扫描时按时序建立起来的，即使用逐点成像的方法获得放大像。

扫描隧道显微镜

扫描隧道显微镜亦称为“扫描穿隧式显微镜”、“隧道扫描显微镜”，是一种利用量子理论中的隧道效应探测物质表面结构的仪器。它于1981年由格尔德·宾宁（G．Binnig）及海因里希·罗雷尔（H．Rohrer）在IBM位于瑞士苏黎世的苏黎世实验室发明，两位发明者因此与恩斯特·鲁斯卡分享了1986年诺贝尔物理学奖。

透射电子显微镜(Transmission Electron Microscope,简称TEM),可以看到在光学显微镜下无法看清的小于0.2um的细微结构，这些结构称为亚显微结构或超微结构。要想看清这些结构，就必须选择波长更短的光源，以提高显微镜的分辨率。1932年Ruska发明了以电子束为光源的透射电子显微镜，电子束的波长要比可见光和紫外光短得多，并且电子束的波长与发射电子束的电压平方根成反比，也就是说电压越高波长越短。目前TEM的分辨力可达0.2nm。

相差显微镜是荷兰科学家Zernike于1935年发明的，用于观察未染色标本的显微镜。活细胞和未染色的生物标本，因细胞各部细微结构的折射率和厚度的不同，光波通过时，波长和振幅并不发生变化，仅相位发生变化（振幅差），这种振幅差人眼无法观察。而相差显微镜通过改变这种相位差，并利用光的衍射和干涉现象，把相差变为振幅差来观察活细胞和未染色的标本。相差显微镜和普通显微镜的区别是：用环状光阑代替可变光阑， 用带相板的物镜代替普通物镜，并带有一个合轴用的望远镜。

答：透射电镜生物标本制备过程⑴取材⑵固定:保持细胞内部结构不改变。（戊二醛：在蛋白质分子之间形成共价键, 将它们交联在一起。四氧化锇：除与蛋白共价结合外,还对脂类有良好的固定效果。）脱水：标本必须置于高真空中进行电镜观察,所以电镜生物标本不能含水。梯度乙醇。包埋: 为使柔软生物组织制成超薄切片（良好支撑）,并使切片耐受高真空、电子轰击，应在切片前将标本进行包埋,常用环氧树脂。切片:电子穿透力很弱,需将样品制成40～50nm厚薄片。约为细胞的1/200厚度。染色:生物分子由原子序数低的轻元素组成，它们散射电子能力弱,在电镜下几乎不存在明暗反差,需加大生物样品反差,进行染色。重金属浸染。

(透射电镜样品提高反差的方法:⑴负染法⑵ 冰冻蚀刻)扫描电子显微镜标本制备：取材、清洗、 固定、干燥、镀膜因为电镜观察所制备的的标本都是将细胞脱水后的死标本，所以不能观察活性标本~

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