吲哚检测的化学原理，为什么在这个试验中用吲哚的

色氨酸是植物体内生长素生物合成重要的前体物质，其结构与IAA（吲哚乙酸，即生长素）相似，在高等植物中普遍存在。可以通过色氨酸合成生长素，有两条途径：

（1）色氨酸首先氧化脱氨形成吲哚丙酮，再脱羧形成吲哚乙醛；吲哚乙醛在相应酶的催化下最终氧化为吲哚乙酸。

（2）色氨酸先脱羧形成色胺，然后再由色胺氧化脱氨形成吲哚乙酸。

吲哚（indol）试验：有些细菌如大肠埃希菌、变形杆菌、霍乱弧菌等能分解培养基中的色氨酸生成吲哚（靛基质），经与试剂中的对二甲基氨基苯甲醛作用，生成玫瑰吲哚而呈红色，是为吲哚试验阳性。

原理：细菌分解蛋白胨中的色氨酸，生成吲哚（靛基质），经与试剂中的对位二甲基氨基苯甲醛作用，生成玫瑰吲哚。

培养基：邓亨氏蛋白胨溶液

试剂：常用下述两种。

1．欧立希氏（Ebrlich′s）吲哚试剂

对位二甲基氨基苯甲醛（P-dimethyl aminobenzaldehyde） 1g

纯乙醇 95ml

浓盐酸 20ml

先以乙醇溶解试剂，后加盐酸，要避光保存。

2．Kovacs试剂

对位二甲基氨基苯甲醛5g

戊醇（聚异戊醇）75g

浓盐酸 25ml

方法：以接种环接种待试细菌的新鲜斜面培养物于邓亨氏蛋白胨溶液中， 37℃培养24～48小时后（可延长4～5天）。于培养液中加入戊醇或二甲苯2～3ml，摇匀，静置片刻后，沿试管壁加入试剂2毫升。在戊醇或二甲苯下面的液体变红色者为阳性反应。

也可将一指头大的脱脂棉，滴上两滴欧立希氏试剂，再在同处加滴两滴高硫酸钾（K2S2O4）饱和水溶液，置于含培养液的被检试管中，离液面约半寸，置烧杯内水浴煮沸为止，脱脂棉上出现红色为阳性。此法略繁，但省试剂且准确，因为将试剂加到液体中，吲哚和粪臭素均呈阳性，而用此法，只是吲哚（它能挥发）呈阳性反应。

亦可以滤纸片浸湿1%的二甲基苯丙烯甲醛的10％浓HCl溶液，然后以接种环刮取一环琼脂的纯培养物涂布于该滤纸上。

细菌涂印周围呈蓝色者为阳性，细菌涂印周围无色泽变化或淡黄色者为阴性。

厌氧菌用蛋白胨水

蛋白胨 20g

葡萄糖 10g

硫乙醇酸钠 1g

Na2HPO4（无水） 2g

琼脂 1g

蒸馏水 1000ml

加热溶解，调整pH至7.4～7.6，过滤，分装小试管，15磅高压15分钟。

显然是曼尼奇（又译曼尼希）反应,以-R表示β-吲哚基,则反应机理为：

NH(CH3)2+CH2O→(+)NH(CH3)2-CH2OH—[脱水]→CH2=(+)N(CH3)2↔CH2(+)-N(CH3)2

R-H+CH2(+)-N(CH3)2→R-CH2N(CH3)2+H+

第一步是氮对甲醛的羰基的亲核加成,产物脱水后形成一个烯胺正离子,该正离子具有一定的碳正离子性质,可以进攻吲哚这样的富电子芳环,完成反应.

具体可以去搜索“曼尼奇反应”作进一步了解.

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