要对细菌做SEM，前处理是什么？需要把细菌弄成干态或者固定是吗？求详细的步骤

取样，戊二醛等固定液固定，酒精梯度脱水，冷冻干燥or二氧化碳临界点干燥，喷金或蒸碳。

以上四个步骤，根据所使用的SEM成像的真空模式，可以有所省略。

如果用ESEM，取样后可直接放入样品室，在一定“环境真空”下进行观察；如果采用LV模式，直到干燥，可以免喷金；高真空模式，必须做到喷金等样品导电处理。

具体可到公益网站：中山大学生物电子显微学实验室网站查询

扫描电镜样品制备: 基础课程，生物样品因含水，其样品制备有其特殊性。

http://bioem.sysu.edu.cn/wiki/index.php/%E9%A6%96%E9%A1%B5

有时候公益网站有点那个，不好点开，请看转载链接http://coxem2010.blog.163.com/blog/static/16510375720114192413945/

扫描电镜成像原理主要有两种，二次电子像(secondary electron)：形貌衬度，就是你的细菌外表有凸凹形貌，可以拍摄形貌像；背散射电子探头(back scatter electron)：原子序数衬度，你可以进行染色，把一些重金属的盐类设法溶进细菌体内，然后用BSE观察时，细菌就是白亮的。

具体不懂的可以联系我，希望对你有帮助。

物体表面细菌培养采样方法有接触皿采样法、淋洗采样法、拭子采样法三种。

一、接触皿采样法

TSA、NA和SDA培养基接触皿，取下皿盖将培养基凸起面按压到采样物体表面5s—10s后，将皿拿起盖好皿盖，细菌置于30℃ —35℃培养48h。

TSA接触皿测试菌种为金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、枯草芽胞杆菌、黑曲霉、白色念珠菌；NA接触皿测试菌种为金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、枯草芽胞杆菌；SDA接触皿测试菌种为黑曲霉、白色念珠菌。

二、淋洗采样法：

将20ml生理盐水缓缓倾注到装有菌种载体的平皿中，倾注时注意液体倾注点处于菌种载体中心位置，全部倾注后，将无菌平皿轻轻向上下左右各晃动5次，晃动幅度大概在2cm—3cm。

之后使用移液枪将平皿中的生理盐水全部取出，作为供试液，取10ml 进行活菌计数，采用薄膜过滤法，滤干后取出滤膜，细菌滤面朝上贴于TSA90mm平板培养基和NA90mm平板培养基上，置于30℃—35℃培养48h观察计数。计数结果的2倍为淋洗取样活菌计数结果。

三、拭子采样法

取无菌拭子，用无菌的0.9%氯化钠溶液5ml 浸湿，在取样点面上擦拭，完成后迅速将拭子放入无菌试管中并密封，加入10ml0.9%生理盐水，使用旋涡振荡器充分振荡后作为供试液。

取5ml进行活菌计数采用薄膜过滤法过滤，滤干后取出滤膜，细菌滤面朝上贴于TSA90mm平板培养基和NA90mm平板培养基上，置于30℃—35℃培养48h观察计数。计数结果的2倍为擦拭取样活菌计数结果。

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