番红固绿染色 具体步骤 谢谢！万分感谢！

我做的时候是将切片脱蜡后先酒精梯度复水，1%番红水溶液染24h，自来水冲洗掉多余染液，然后酒精梯度脱水，固绿酒精溶液染色40s，冲洗掉多余染液，封片！复水和脱水时每个梯度大约5min

彗星实验可以检测DNA链断裂损伤。可能有紫外线照射或其他因素造成了突变～～ 1988年Singh等[5]建立了碱性彗星实验，我们对该实验流程进行改良，首先改变了制胶方法，并在裂解后加入水洗的操作步骤，中和完成后再用梯度酒精脱水。具体流程如下：①镀膜法制备底胶，将洁净的载玻片在0.2％的常熔点琼脂糖中浸没1 min后，置37 ℃孵箱烘烤过夜；实验时将细胞悬液与低熔点琼脂糖(42 ℃)以1∶1的比例在离心管中混匀，立即灌胶(先用盖玻片在已包被的载片上搭一个22 mm×10 mm×0.17 mm的小槽再灌胶)，4 ℃静置15 min后取下盖片，制得含细胞胶层。②裂解，4 ℃，1 h。③水洗，三蒸水4 ℃水洗3 次，5 min/次。④解旋，4 ℃，20 min。⑤电泳，4 ℃，20 min，0.8 V/cm。⑥中和，3 次，每次5 min。⑦梯度酒精脱水，(50％、70％、80％、90％、100％、100％，常温下各一次，每次5 min)。⑧染色(EB，20 μg/ml，20 μl),之后镜检，每组随机取50 个细胞，用CASP分析软件进行分析[11～14]。1.7　统计学方法　实验数据进行t 检验。 2　结　果2.1　改良实验方法的结果　通过对制胶方法的改进，基本解决了实验中常见的脱胶现象。同时经梯度酒精脱水后的彗星图象基本位于一个焦平面上，采图更为方便、可靠。

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