要对细菌做SEM，前处理是什么？需要把细菌弄成干态或者固定是吗？求详细的步骤

取样，戊二醛等固定液固定，酒精梯度脱水，冷冻干燥or二氧化碳临界点干燥，喷金或蒸碳。

以上四个步骤，根据所使用的SEM成像的真空模式，可以有所省略。

如果用ESEM，取样后可直接放入样品室，在一定“环境真空”下进行观察；如果采用LV模式，直到干燥，可以免喷金；高真空模式，必须做到喷金等样品导电处理。

具体可到公益网站：中山大学生物电子显微学实验室网站查询

扫描电镜样品制备: 基础课程，生物样品因含水，其样品制备有其特殊性。

http://bioem.sysu.edu.cn/wiki/index.php/%E9%A6%96%E9%A1%B5

有时候公益网站有点那个，不好点开，请看转载链接http://coxem2010.blog.163.com/blog/static/16510375720114192413945/

细胞固定化方法有：Adsorption（吸附）；covalent bonding（共价结合）；Cross linking（交联）；Entrapment（包埋）、Encapsulation（微胶囊） 。下面对这几种做具体介绍。

一、吸附法

1，原理

利用载体和细胞表面所带电荷的静电引力（van der Walls forces），使细胞吸附于载体上。吸附法可分为物理吸附和离子吸附两种。该法操作简单，固定化过程对细胞活性影响小。

2，载体的材料

采用吸附法固定细胞，所用的载体主要有：硅藻土、木屑、多孔玻璃、活性炭、

多孔陶瓷、离子交换树脂和等。塑料

3，影响吸附固定化的因素

（1）Z-电位

（2）细胞的性质和细胞壁的组成

（3）载体的性质

（4）pH

二、共价结合法

利用细胞表面的反应基团（如氨基、羧基、羟基、巯基、咪唑基）与活化的无机或有机载体反应，形成共价键将细胞固定。用该法制备的固定化细胞一般为死细胞。

三、交联法

利用双功能或多功能试剂与细胞表面的反应基团（如氨基、羧基、羟基、巯基、咪唑基）反应，从而使细胞固定。常用的交联剂包括：戊二醛、甲苯二异氰酸酯、双重氮联苯胺。

由于交联试剂的毒性，这一方法具有一定的局限性。

四、包埋法

包埋法是细胞固定化最常用的方法。包埋法可以分为：

1，微胶囊法：利用半透性聚合物薄膜将细胞包裹起来，形成微型胶囊；

2，凝胶包埋法：是在无菌条件下，将生物细胞和胶溶液混合在一起，然后再经过相应的造粒处理，形成直径为1-4mm的胶粒。

常用的包埋剂为：聚丙烯酰胺、琼脂、海藻酸、卡拉胶、二醋酸纤维、三醋酸纤维、明胶等。

五、固定化方法的比较

吸附法：条件温和、方法简便、载体可再生。但操作稳定性差。

共价法：操作稳定性高。但由于试剂的毒性，易引起细胞的破坏。

交联法：可得到高细胞浓度，但机械强度低，无法再生，不适于实际应用。

包埋法：细胞和载体间没有束缚，固定化后，细胞仍保持较高活力。但这类方法只适用于小分子底物。

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