液氮罐加注液氮 操作步骤总结如下

1、自增压液氮罐在加注液氮系统之前，用户必须接受亲自动手安全培训并获得授权进入加油系统的资格。

2、它需要一个至少有两名合格人员的团队来补充液氮，而且你必须疲劳时不涉及补充过程。

3、操作前，您必须了解操作步骤和安全注意事项加注系统，且严格按照标准操作程序进行，无需更改任何定义的条件。

4、在加注过程中使用适当的保护设备，如手套，护目镜，面罩如果发生泄漏，耳塞可防止冷接触灼伤。

5、重新填充前准备连接器。不要接触阀门和容器表面并且在加注过程中不要站在排气的方向。 你必须看整个充值过程中不得离开。 如果有任何异常，请立即停止加注发生情况并向低温组报告。

6、如果在重新灌注液氮或压缩过程中需要减压气，你必须调整调节器。首先关闭调节器并打开电源其次是压缩气体，重新打开调节器并调节流量以适应所需压力。调压器离开时不允许打开压缩气体源同时打开。使用高压装置后需要减压。

7、管路，阀门，仪表，调节器和气体输送管路的内部应保持清洁不会污染油或杂质。

8、高压容器不得连接到液氮加注系统。该液氮容器必须有压力设定在2kg / cm2以下的安全阀。

9、安全之前，液氮容器的剩余压力必须小于0.5巴重新加注启动。

1、选择处于对数生长期的细胞，在冻存前一天换液。将多个培养瓶中的细胞培养液去掉，用0.25%蛋白酶消化。适时去掉yi蛋白酶，加入少量新培养液。用吸管吸取培养液反复吹打瓶壁上的细胞，使其成为均匀分散的细胞悬液。悬浮生产细胞则不要消化处理。然后将细胞收集于离心管中离心10分钟。

2、去上清液，加入含20%小牛血清的*培养基，于4摄氏度预冷15分钟后，逐滴加入已无菌的甘油，用吸管轻轻吹打使细胞均匀，细胞浓度为3乘106重女1乘107之间。

3、将上述细胞分装于安瓿或冷冻塑料管中，安瓿装1至1.5在火焰喷灯上封口，封口处要*封闭，圆滑无勾。冷冻管要将盖子盖紧，并标记好细胞名称和冻存日期，同时作好登记（日期、细胞种类及代次、冻存支数）。

4、将装好细胞的安瓿或冻存管装入沙布袋内；置于液氮容器颈口处存放过夜，次日转入液氮中。采用控制降温速度的方法也可采用下列步骤：先将安瓿置入4摄氏度冰箱中2至3小时，再移至冰箱冷冻室内3至4小时再吊入液氮容器颈气态部分存放2小时，蕞后沉入液氮中。

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