样品在2.5%的戊二醛溶液中4℃固定过夜,然后按下列步骤处理样品:
倒掉固定液,用0.1M,pH7.0的磷酸缓冲液漂洗样品三次,每次15min;
用1%的锇酸溶液固定样品1-2h;
倒掉固定液,用0.1M,pH7.0的磷酸缓冲液漂洗样品三次,每次15min;
用梯度浓度(包括50%,70%,80%,90%和95%五种浓度)的乙醇溶液对样品进行脱水处理,每种浓度处理15min,再用100%的乙醇处理两次,每次20 min。
用乙醇与醋酸异戊酯的混合液(V/V=1/1)处理样品30min,再用纯醋酸异戊酯处理样品1-2h。
临界点干燥。
镀膜,观察。
处理好的样品在荷兰Philips公司的XL30ESEM型环境扫描电镜中观察。
Spurr低粘度包埋剂
ERL-4206 2.5g
NSA 6.5g
DER-736 2.0g
DMAE 0.1g
前三种试剂混合均匀后,加入DMAE,充分混合。按每个样品2.5g的用量配制。70℃聚合8h以上。
——blhu
sem前处理脱水目的:脱水至无水状态,为减缓其挥发速度,退回至85%脱水剂,取出,空气中自然干燥。优点:脱水剂为低表面张力物质,挥发过程中减少了样品的收缩及损伤
缺点:常常使样品发生变形收缩
适用范围:铸型或体表比较坚硬的甲壳昆虫等含水量较少的样品
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