如何分析胞外聚合物

微生物的胞外聚合物（ECP）是微生物在一定条件下，在其代谢过程中分泌的、包围在微生物细胞壁外的聚合化合物，包括荚膜、粘液层以及其他表面物质。经过分析可以知道，这些聚合物的成分为脂类、多糖、蛋白质等。微生物胞外聚合物可以应用于多种工业，如：石油开采工业、农业、环境保护和环境工程等方面。其主要作用表面活性剂、絮凝剂或助凝剂和沉淀剂

(1)胞外聚合物的提取

胞外聚合物（Extracelluler

Polymer

Substances,

EPS）与细胞结合紧密，需要特定的方法才能将其从污泥中分离提出。在本实验中采用Frølund等人[

]的方法来提取活性污泥表面的胞外聚合物。

首先，从反应器中取50mL活性污泥样品，在2000g、室温下离心15min后倒出上清液。离心后再向留在离心管内的生物体加入由526mg•L-1

NaCl，74.56mg•L-1KCl，760.2mg•L-1Na3PO4和552mg•L-1NaH2PO4组成的磷酸盐缓冲溶液，使之再次呈悬浮液态。再将悬浮污泥样品移入烧杯中，在其中加入90g•gMLVSS-1的离子交换树脂（732阳离子交换树脂）并以600rpm转速搅拌2h，使之混合。混合后再于4000g离心300min以去除树脂和生物体，上清液则为EPS提取液[

]。

(2)胞外聚合物的分析方法

EPS提取物中主要是多糖、蛋白质和DNA。多糖的测定采用蒽酮—H2SO4比色法[

]。即高温下糖类会被H2SO4脱水生成糠醛或糠醛衍生物，并与蒽酮（C14H10O）缩合成蓝色化合物，在620nm处测定吸光度（721型分光光度计），以葡萄糖的标准曲线可换算出多糖的含量[

,

]。

蛋白质采用紫外吸收法测定，同时测定260nm和280nm处的吸光度，利用下式计算蛋白质的浓度(mg•mL-1)：ρ蛋白质=1.45×A280nm-0.74×A260nm，该方法可消除样品中和算对测定值的干扰。EPS的含量最终以单位质量MLVSS中各成分的总量计。

DNA的测定采用修正的Brunk方法[

]，主要试剂为：用100

mM

NaCl中配制0.2

ppm

DAPI试剂

(4,

6-二咪基-2-苯基吲哚)，10

mM

EDTA，10

mM

TRIS，pH

7。步骤:

将100

µL的

EPS

提取液用吸液管装入试管中并加入2.5

ml上述试剂。直接测定样品（激发波长360nm、发射波长450

nm），Salmon实验采用标准方法。

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