请问我这个DNA电泳条带怎么看?非常感谢

请问我这个DNA电泳条带怎么看?非常感谢,第1张

首先看第二泳道,能够看见两条带,一般的质粒跑完电泳都是这种情况,因为质粒容易开链,变成线性的,或者是半线性半环状,而环状的比线性的跑的快,所以上面那条浅的应该是开链的质粒,下面的是环状的质粒,不过不要紧,一般都是这样。看第三条泳带,说明你的目的条带大约在750bp。再看第四个泳带,靠近点样孔的是你切掉了目的基因的质粒,此时为线性的质粒,能够看见它比第二条泳道那条亮带跑的要慢一些,这是对的结果。还是因为环状的比线性的跑的快。而第四条泳带下面那个浅带,是你的目的基因,它与你PCR产物大小一样。因此说明了你的重组质粒构建成功,目的基因已经连入质粒了。恭喜你!第一次做就能做成这样,羡慕啊。

影响的因素很多。主要的有:

1、 DNA的分子大小

线状双链DNA分子在一定浓度琼脂糖凝胶中的迁移速率与DNA分子量对数成反比,分子越大则所受阻力越大,迁移得越慢。

2、 琼脂糖浓度

一个给定大小的线状DNA分子,其迁移速度在不同浓度的琼脂糖凝胶中各不相同。分离小于0.5kb的DNA片段所需胶浓度是 1.2-1.5%,分离大于10kb的DNA分子所需胶浓度为0.3-0.7%, DNA片段大小间于两者之间则所需胶浓度为0.8-1.0%。

3、 DNA分子的构象

相同分子量的线状、开环和超螺旋DNA在琼脂糖凝胶中移动速度是不一样的,超螺旋DNA移动最快,而线状双链DNA移动最慢。

4、 电源电压

在低电压时,线状DNA片段的迁移速率与所加电压成正比。但是随着电场强度的增加,不同分子量的DNA片段的迁移率将以不同的幅度增长,片段越大,因场强升高引起的迁移率升高幅度也越大,因此电压增加,琼脂糖凝胶的有效分离范围将缩小。要使大于2kb的DNA片段的分辨率达到最大,所加电压不得超过5v/cm。

5、嵌入染料的存在

荧光染料溴化乙啶用于检测琼脂糖凝胶中的DNA,染料会嵌入到堆积的碱基对之间并拉长线状和带缺口的环状DNA,使其刚性更强,还会使线状DNA迁移率降低 15%。

6、 离子强度影响

电泳缓冲液的组成及其离子强度影响DNA的电泳迁移率。在没有离子存在时(如误用蒸馏水配制凝胶),电导率最小,DNA几乎不移动,在高离子强度的缓冲液中(如误加10×电泳缓冲液),则电导很高并明显产热,严重时会引起凝胶熔化或DNA变性。


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