要对细菌做SEM，前处理是什么？需要把细菌弄成干态或者固定是吗？求详细的步骤

取样，戊二醛等固定液固定，酒精梯度脱水，冷冻干燥or二氧化碳临界点干燥，喷金或蒸碳。

以上四个步骤，根据所使用的SEM成像的真空模式，可以有所省略。

如果用ESEM，取样后可直接放入样品室，在一定“环境真空”下进行观察；如果采用LV模式，直到干燥，可以免喷金；高真空模式，必须做到喷金等样品导电处理。

具体可到公益网站：中山大学生物电子显微学实验室网站查询

扫描电镜样品制备: 基础课程，生物样品因含水，其样品制备有其特殊性。

http://bioem.sysu.edu.cn/wiki/index.php/%E9%A6%96%E9%A1%B5

有时候公益网站有点那个，不好点开，请看转载链接http://coxem2010.blog.163.com/blog/static/16510375720114192413945/

1．观察前的准备

（1）置显微镜于平稳的实验台上,镜座距实验台边沿约为一寸左右.镜检者姿势要端正,一般用左眼观察,右眼便于绘图或记录,两眼必须同时睁开,以减少疲劳,亦可练习左右眼均能观察.显微镜构造见右图.

（2）显微镜是光学精密仪器,在使用时要特别小心,使用前要熟悉显微镜的结构和性能,检查各总零件是否完好无损.镜身有无灰尘,镜头是否清洁,做好必要的清洁和调整工作.

（3）调节光源　对光时应避免直射光源,因直射光源影响物像的清晰,损坏光源装置和镜头,并刺激眼睛.晴天可直接用窗外的散射光,如明暗天气,可用8－30W日光灯或显微镜灯照明

调节光源及光照的一般步骤：

将低倍物镜旋至镜筒下方,旋转粗调节轮,使镜头和载物台距离约为0.5cm左右.

上升聚光器,使与载物台表面同样高.否则使用油镜时光线较暗.

左眼看目镜,调节反光镜镜面角度（反光镜有凹平两面,光线较强自然光源,宜用平面镜；光线较弱的天然光源或人工光源,宜用凹面镜.）对光使全视野内为均匀的明亮度.凡检查染色标本时,光线应强；检查未染色标本时,光线不宜太强.可通过扩大或缩小光圈、升降聚光器、旋转反光镜调节光线．

2．低倍镜观察.

检查的标本须先用低信镜观察,因为低倍镜视野较大,易发现目标和确定检查的位置.

（1）先将标本玻片置于载物台上,并将标本部位处于物镜的正下方,转动粗调节轮,下降物镜或上升载物台使物镜至标本0.5cm处.

（2）左眼看目镜,同时反时针方向慢慢旋转粗调节轮,当在视野内出现物象后,改用细调节轮,上下微微转动,直至视野内获得清晰的物象.然后认真观察标本各部位,确定并将需进一步要观察的部位移视野中央,准备用高倍镜观察.

3．高倍镜观察；

将高倍镜转正至正下方,在转换接物镜时,需用眼睛在侧面观察,避免镜头与玻片相撞.然后由接目镜观察,再仔细调节光圈和聚光镜,使光线的明亮度适宜,同时再仔细正反两方向微转动细调节轮,直至获得清晰的物象后为止,找到最适宜于观察的部位.需进一步要观察的部位移视野中央,准备用油镜观察.

4．油镜观察：

（1）上升聚光器,全开虹彩光圈

（2）用粗调节轮提起镜筒或下降载物台,转动转换器将油镜转至镜筒正下方.在玻片标本的镜检部位滴上一滴香柏油.右手顺时针方向慢慢转动粗调节轮使镜筒下降或载物台上升,与此同时,从显微镜的侧面观察使油镜浸入油中,直到几乎与标本接触时为止.注意不要压到标本,以免压碎玻片,甚至损坏油镜头.

（3）从接目镜内观察,进一步调节光线,使光线明亮,再用粗调节轮将镜筒徐徐上升或将载物台徐徐下降,直到视野内出现物像为止,然后用细调节轮校正焦距.如油镜已离开油面而仍未见物象,必须再从侧面观察,将油镜降下,重复操作至物象看清为止.

5．换片

观察完一个标本后,如果想要再观察另一标本时,需先将高倍物镜（或油竟镜）转回到低倍物镜,取出标本,按放片的方法换上新片,即可观察.千万不可在高倍物镜（或油竟镜）下换片,以防损坏镜头.

二、显微镜的保养

（1）油镜使用完毕,先用擦镜纸擦去镜头上的油,再取一张擦镜纸,滴上少量的二甲苯擦拭,然后再取另一张新擦镜纸将镜头上残留的二甲苯擦净.否则粘固透镜的胶质会被二甲苯溶解,日久镜片易移位脱落.

（2）下降聚光器,打开虹彩光圈,使反光镜垂直于镜座,以免积聚灰尘.

（3）用绸布将镜身擦拭干净（切不可用手擦拭）,除去灰尘、油污、水汽,以免生锈长霉.

（4）使显微镜的各部件恢复回原位,下降镜筒,使物镜呈“八”字形置于载物台上,然后将显微镜送回镜箱中.

（5）显微镜应存放在干燥阴凉的地方,不要放在强烈的日光下暴晒,霉雨季节应在显微镜箱内放置干燥剂（硅胶）,如长时间不用,则光学部分应卸下放在干燥器中,以免受潮生霉.

（6）显微镜应严禁与挥发性药品或腐蚀性药品放在一起,如碘片、盐酸、硫酸等药品.

三、注意事项

1．拿取显微镜必须一只手拿着镜臂,一只手托着镜座,并保持镜身的上下垂直,应避免震动,轻放台上.切不可一只手提起,以防显微镜、反光镜功目镜坠落.

2．使用前应将镜身擦拭一遍、用擦镜纸将镜头擦净（切不可用手指擦抹）.若遇到镜台或镜头上有干香柏油,可用擦镜纸沾取少量二甲苯将其擦去.

3．使用时如发现显微镜操作不灵活或有损坏,不要擅自拆卸修理,应立即报告指导教师处理.

4．注意保护镜头,切不可压碎标本被片,损坏镜头

5．显微镜使用完毕,应登记显微镜使用卡经指导教师检查后放回镜箱.

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