1、优点:发生氧化还原反应后的产物能够在煮沸条件下显棕红色,且在一定浓度范围内颜色深浅与还原糖含量成比例关系的原理,用比色法测定还原糖含量。
2、缺点:显色的深浅只与糖类游离出还原基团的数量有关,而对还原糖的种类没有选择性,故DNS方法适合用在多糖(如纤维素、半纤维素和淀粉等)水解产生的多种还原糖体系中。
多糖在酶作用下水解成单糖分子,并迅速脱水生成糖醛衍生物,与苯酚缩合成有色化合物,在适当波长下和一定浓度范围内,吸收值与糖浓度呈线性关系,从而可比色测定其含量。苯酚比色不能排除还原性杂质(包括单糖)的干扰,且显色剂极
易氧化而影响比色。
3
,5一二硝基水
杨酸法(DNs法),选用以
水解前测得空白值校正水解后样品测定值,达到消除还原性杂质干扰的效果
两种不同的DNS配制方法,加苯酚和无水硫酸钠,目的为提高显色色度。与不加苯酚和无水硫酸钠的DNS相比,吸光值高于后者。标准曲线回归方程斜率大于后者,既产生的比色常数也低于后者。
用苯酚-硫酸法测定糖的原理是使多糖在浓硫酸条件下先水解成单糖并脱水,然后再加入苯酚,苯酚与脱水后的单糖缩合形成有色化合物,在490nm处有最大吸收,在一定范围内其吸光度值和糖的浓度成正比,即可用吸光光度法分析出处理后的溶液中单糖的含量。根据以上原理可知苯酚-硫酸法测定的实际上是总糖。DNS 法为在NaOH和丙三醇存在下,3,5-二硝基水杨酸(DNS)与还原糖共热后被还原生成氨基化合物。在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈桔红色,在540nm波长处有最大吸收,在一定的浓度范围内,还原糖的量与光吸收值呈线性关系,利用比色法可测定样品中的含糖量。
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