在分子克隆实验中，有时我们会在待扩增的目的基因片段两端加上特定的酶切位点，用于后续的酶切和连接反应。由于直接暴露在末端的酶切位点不容易直接被限制性核酸内切酶切开，因此在设计PCR引物时，人为的在酶切位点序列的5‘端外侧添加额外的碱基序列，即

在分子克隆实验中，有时我们会在待扩增的目的基因片段两端加上特定的酶切位点，用于后续的酶切和连接反应。由于直接暴露在末端的酶切位点不容易直接被限制性核酸内切酶切开，因此在设计PCR引物时，人为的在酶切位点序列的5‘端外侧添加额外的碱基序列，即

保护碱基通常是GCGC和GGCC，由于限制位点的掺入，经PCR扩增的靶DNA片断可以方便的克隆到所选的载体分子上，毕竟酶不可能那么精准的识别酶切位点。如果要加在序列的5‘端，就在酶切位点识别碱基序列（红色）的5’端加上相应的碱基（黑色），相

保护碱基通常是GCGC和GGCC，由于限制位点的掺入，经PCR扩增的靶DNA片断可以方便的克隆到所选的载体分子上，毕竟酶不可能那么精准的识别酶切位点。如果要加在序列的5‘端，就在酶切位点识别碱基序列（红色）的5’端加上相应的碱基（黑色），相

保护碱基通常是GCGC和GGCC，由于限制位点的掺入，经PCR扩增的靶DNA片断可以方便的克隆到所选的载体分子上，毕竟酶不可能那么精准的识别酶切位点。如果要加在序列的5‘端，就在酶切位点识别碱基序列（红色）的5’端加上相应的碱基（黑色），相

定义 限制性内切酶 识别特定的DNA序列，除此之外，酶蛋白还要占据 识别位点 两边的若干个碱基，这些碱基对内切酶稳定的结合到DNA 双链 并发挥切割DNA作用是有很大影响的，被称为保护碱基。原理 在 分子克隆 实验中，有时我们会

定义 限制性内切酶 识别特定的DNA序列，除此之外，酶蛋白还要占据 识别位点 两边的若干个碱基，这些碱基对内切酶稳定的结合到DNA 双链 并发挥切割DNA作用是有很大影响的，被称为保护碱基。原理 在 分子克隆 实验中，有时我们会

首先要明确什么是保护碱基限制性内切酶识别特定的DNA序列，除此之外，酶蛋白还要占据识别位点两边的若干个碱基，这些碱基对内切酶稳定的结合到DNA双链并发挥切割DNA作用是有很大影响的，被称为保护碱基。添加保护碱基的目的在分子克隆实验中，

在分子克隆实验中，有时我们会在待扩增的目的基因片段两端加上特定的酶切位点，用于后续的酶切和连接反应。由于直接暴露在末端的酶切位点不容易直接被限制性核酸内切酶切开，因此在设计PCR引物时，人为的在酶切位点序列的5端外侧添加额外的碱基序列，即

在分子克隆实验中，有时我们会在待扩增的目的基因片段两端加上特定的酶切位点，用于后续的酶切和连接反应。由于直接暴露在末端的酶切位点不容易直接被限制性核酸内切酶切开，因此在设计PCR引物时，人为的在酶切位点序列的5端外侧添加额外的碱基序列，即