给家兔注射大肠杆菌应该注射多少？

方法　以10 %BaSO4 肉汤作佐剂,用1×10 8、3×10 8、1×10 9、2×10 9、4×10 9cfu/ml 5个浓度的大肠杆菌家兔腹腔注射,观察家兔一般情况、体温、外周血白细胞总数和中性粒细胞变化,记录死亡时间,存活家兔第10天处死,取大网膜病理检查。结果　5组家兔的白细胞总数和中性粒细胞百分比与给菌前比较有明显变化。3×10 8cfu/ml组的死亡率适中(4 5 % ) ,而且各个时间段均有死亡,体温升高持续时间最长,大网膜病理检查示有不同程度炎症细胞浸润,部分有脓肿形成。结论　以10 %BaSO4 肉汤作佐剂,用3×10 8cfu/ml的大肠杆菌腹腔注射家兔后,可以得到一个感染程度适中,病理改变和临床相似,可比性强,重复性好的细菌性腹膜炎模型。

具体参考这篇文献。。。http://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTotal-ZYFX200505000.htm

使用牛肉膏蛋白胨培养基

组成成分：牛肉膏

3g,蛋白胨

10g,nacl

5g,琼脂

15～20g,水1000ml,ph7.4～7.6。

具体配置步骤：

1.称药品

按实际用量计算后,按配方称取各种药品放入大烧杯中.牛肉膏可放在小烧杯或表面皿中称量,用热水溶解后倒入大烧杯也可放在称量纸上称量,随后放入热水中,牛肉膏使与称量纸分离,立即取出纸片.蛋白胨极易吸潮,故称量时要迅速.

2.加热溶解

在烧杯中加入少于所需要的水量,然后放在石棉网上,小火加热,并用玻棒搅拌,待药品完全溶解后再补充水分至所需量.若配制固体培养基,则将称好的琼脂放入己溶解的药品中,再加热融化,此过程中,需不断搅拌,以防琼脂糊底或溢出,最后补足所失的水分.

3.

调ph

检测培养基的ph,若ph偏酸,可滴加lmol/l

naoh,边加边搅拌,并随时用ph试纸检测,直至达到所需ph范围.若偏碱,则用lmol/l

hcl进行调节.ph的调节通常放在加琼脂之前.应注意ph值不要调过头,以免回调而影响培养基内各离子的浓度.

4.过滤

液体培养基可用滤纸过滤,固体培养基可用4层纱布趁热过滤,以利培养的观察.但是供一般使用的培养基,这步可省略.

5.分装

按实验要求,可将配制的培养基分装入试管或三角瓶内.分装时可用漏斗以免使培养基沾在管口或瓶口上而造成污染.

分装量:固体培养基约为试管高度的l/5,灭菌后制成斜面.分装入三角瓶内以不超过其容积的一半为宜.半固体培畅筏扳禾殖鼓帮态爆卡养基以试管高度的1/3为宜,灭菌后垂直待凝.

6.加棉塞

试管口和三角瓶口塞上用普通棉花(非脱脂棉)制作的棉塞.棉塞的形状,大小和松紧度要合适,四周紧贴管壁,不留缝隙,才能起到防止杂菌侵入和有利通气的作用.要使棉塞总长约3/5塞入试管口或瓶口内,以防棉塞脱落.有些微生物需要更好的通气,则可用8层纱布制成通气塞.有时也可用试管帽或塑料塞代替棉塞.

7.包扎

加塞后,将三角瓶的棉塞外包一层牛皮纸或双层报纸,以防灭菌时冷凝水沾湿棉塞.若培养基分装于试管中,则应以5支或7支在一起,再于棉塞外包一层牛皮纸,用绳扎好.然后用记号笔注明,培养基名称,组别,日期.

8.灭菌

将上述培养基于121.3℃湿热灭菌20min.如因特殊情况不能及时灭菌,则应故人冰箱内暂存.

9.无菌检查

将灭菌的培养基放入37℃温箱中培养24～48h,无菌生长即可使用,或贮存于冰箱或清洁的橱内,备用.

大肠杆菌的培养：

37摄氏度，恒温培养48到72小时，因为接种时和具体培养条件的不同，其生长一般都在2天外才能长出明显的菌落。

菌落特征：乳白色，圆形，菌落边缘整齐，表面光滑，表面和背面颜色一致。

---